实验内容：计数法测定细胞生长曲线
作者：王卫东实验日期：2001.10.24-2001.10.31
实验目的：学习细胞计数的方法；熟悉测定生长曲线的基本原理、方法，了解其应用。

实验原理：一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后度过长短不一的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期，在达到饱和密度后，细胞停止
生长，进入平顶期，然后退化衰老。

典型的生长曲线即可分为潜伏期、
指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时相
（潜伏期、指数生长期和平顶期）是每个细胞系所共有的特征。

通过
测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定
细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素
对细胞生长的影响。

本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续
对细胞计数（通常为7d，一般应每次计数3瓶细胞取平均值），然后
以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。

仪器、材料和试剂：
1、仪器：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、血球计数板
2、材料：培养瓶、试管、吸管、移液管、废液缸、HeLa细胞、盖玻片、酒精灯
3、试剂：培养基（含小牛血清）、0.25%胰蛋白酶
实验步骤：
1、细胞悬液制备：取生长良好接近汇合的HeLa细胞，胰酶消化，再加新鲜培
养基制成细胞悬液后计数。

2、接种：根据细胞计数结果，按每瓶5×104个接种细胞（加3mL培养基，实
际接种每瓶5.9×104个）作传代培养（理论上应该每人接种21瓶细胞，每天取3瓶计数，但实际每人只接种7瓶）。

3、计数：24h后开始作细胞计数，以后每隔24h计数一次，连续计数7天。

4、绘图：根据计数结果，绘制HeLa细胞生长曲线。

结果与讨论：
1、细胞计数结果如下：。