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实验方法
1、预备实验 （1）摸索上下限：
即用少量动物粗摸索出使 全部动物死亡的最小剂量（LD100/Dm） 和 无一动物死亡的最大剂量（ LD0/Dn ）。
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（2）等比溶液配制： A、确定组数、组间剂量比（r）：
一般地，设组数n＝5~8，r=0.7~0.85
r ( n1) Dn Dm
0.5%中性品红溶液
标 记 法
10
40
10
70
50
20 80
30 60 90
双色标记法
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小鼠的基本操作技术
腹腔注射
1、针头刺入部位不宜太 接近上腹部或太深，以 免刺破内脏。针头与腹 腔的角度不宜太小，避 免刺入皮下。 2、使用针头不宜太粗， 避免药液注射后从注射 孔流出。
12
灌胃给药
1.用左手拇指和食指抓住鼠两 耳和头部皮肤，其他三指抓住 背部皮肤，将鼠抓持在手掌内， 固定好动物，头部和颈部保持 很平,右手取注射器进行灌胃。 2.灌时针头沿鼠口角通过食管 进入胃内。灌时如很通畅，则 表示针头已进入胃内；如动物 有呕吐动物或强烈挣扎，必须 拔出后按上述方法重新操作。 决不可进针不顺硬向里插。
（2）自身对照（给药前后）
23
均衡随机法分组：先按易控制的因素（性别、年 龄、体重等）均衡分档，然后在每一档随机取出 等量的动物分配到各组，使难控制的因素（活泼 程度、饥饱、疲劳程度等）得到随机安排。
给药后观察记录1小时内小鼠死亡数 （呼吸停止），并记录中毒症状；
全班作为一个整体实验资料，分小组完成， 然后汇总结果。
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3
组别 动物数 剂量D logD=X 死亡动 死亡率 pi
（只） （mg/k
物数 （%）
、
g）
（只）
结
1
10 0.2770 -0.5575
2
10 0.3645 -0.4383
– 3． 单击“计算”按钮计算LD50等参数。
7
实验材料
实验动物： 昆明种小鼠，体重18-22g， 雌雄兼用，实验前禁食12h，不禁水。
实验器材： 1ml注射器、电子秤、鼠笼、电子计算器
实验药品：
新斯的明、苦味酸
8
小鼠的基本操作技术
小鼠的捉持
9
小鼠的基本操作技术
小鼠的编号：
单 色
采用不同颜料涂擦背毛的方法来标 记或用油性记号笔在尾部标记。 染色剂：3－5％苦味酸溶液、
结• 结论论: ：动物 给药途径
95％可信限
药品
LD50
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注意事项
• 药物称量、配制及给药的准确程度是本实验成 功与否的关键；
• 观察期间室内应保持安静，减少对小鼠的刺激， 以免引起惊厥，加速死亡；
• 注意观察中毒症状及其发生时间、死亡时间； • 动物的种类、品系、体重范围、给药途径及观
察时间等因素均可影响LD50的结果，故在报告 中应加以说明；
组距（d）＝
logD
m－logD n－1
n
本次实验n=7, r=0.76
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B、配液: 等比稀释法
并使每只动物在给药容量上相等
本次实验0.4ml/20g
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2、正式实验
取小白鼠70只，雌雄各半，称重，随机 分成7组，每组10只，标记；
全班同学分成7组，每组10只小鼠，每 只小鼠i.p.给与一个剂量的新斯的明；
法、加权机率单位法（Bliss氏法）、累计 法、序贯法及寇氏法等。 寇氏法较常用，计算简便，结果较准确。
5
LD50测定方法
寇氏法
孙瑞元改进的Kaerber(点斜法)
设计条件：
各组实验动物数相等 各组剂量呈等比数列 各组动物的反应率大致符合常态分布 不要求死亡率必须包括0%与100%
6
LD50测定方法
• Bliss-Finney法：被认为是目前最精确的方法， 受到我国《新药临床前毒理学研究指导原则》 的推荐，计算相当复杂，应用计算机软件计 算则简单易行。
– 1． 启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处 理选项，再进入半数致死量选项。
– 2． 一次输入各组剂量、动物总数、动物ห้องสมุดไป่ตู้亡数等 相关数据。
Σpi：各组反应率（即有效率或死亡率）的总和
Pi：各组动物的死亡率（以小数表示）
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95％可信限：
log LD50 1.96s log LD50 LD50 4.5s log LD50 LD50
pi(1 pi)
s log lD50 d
n 1
S ㏒ LD50 为㏒ LD 50 的标准误
【不良反应】治疗量副作用较小。过量可产生恶心、 呕吐、腹痛、肌肉颤动和肌无力加重等， 22
分析与讨论
实验设计三大原则：重复、随机、对照 重复原则：用1个动物，做一次实验，不能就下结论，用第2 个动物，再做同样的实验，就是重复。科学实验要重复多次， 最大程度地减少偶然性。实验重复的次数越多，结论越正确、 越可靠。 随机原则：使每个实验对象在接受处理因素时，有相同的机 会，以减少主观因素所带来的偏性误差。 对照原则：研究必须有对照，实验室常用的对照有以下几种 形式。（1）组间对照（给药组与对照组）
药理学实验一
The determination of the median lethal dose(LD50) of drugs
1
主要内容
1
实验目的与原理
2
实验材料与方法
3
实验结果
4
实验讨论与分析
2
实验目的
学习和了解药物半数致死量（LD50）的 概念、测定方法、步骤及计算过程，理 解其药理学意义。
20
21
新斯的明
【药理作用】可逆性抑制Ach E，使Ach蓄积而产生 Ｍ、Ｎ样作用。
１、对骨骼肌的兴奋作用最强。 ２、对胃肠道及膀胱平滑肌有较强的兴奋作用。 ３、对心血管、腺体、眼及支气管平滑肌作用较弱。
【临床应用】 １、重症肌无力 ２、腹气胀和尿潴留 ３、阵发性室上性心动过速 ４、非去极化型肌松药和阿托品过量中毒
熟悉改良寇氏(Karber)法测定LD50。 了解急性毒性实验的相关内容及新药安
全性评价的内容。
3
实验原理
LD50是药物、毒物等毒性作用强度的一个标 志，是指在一定条件下，使半数动物出现死 亡的剂量，是描述药物安全性的指标之一。
4
实验原理
LD50越大，其毒性越小。 测定LD50的方法有很多，如目测机率单位
果
3
10 0.4796 -0.3191
记
4
10 0.6311 -0.1999
录
5
10 0.8303 -0.0807
及
6
10 1.0925 0.0384
计
7
10 1.4375 0.1576
算 log LD50 log Dm d ( pi 0.5)
Dm：最大剂量
d：相邻两剂量（D）对数之差（取绝对值）