实验3 细胞核的分离与核酸的鉴定
【实验目的】
1.掌握细胞核及细胞质的分离和纯化的一般原理和操作方法。

2.了解DNA在细胞中的分布和核酸鉴定的原理。

3.进一步掌握离心机的工作原理及正确使用方法。

【实验原理】
1.DNA主要存在于细胞核， RNA主要存在于细胞质。

2.细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各组分分级分离出来。

肝组织破碎后，柠檬酸能抑制脱氧核糖核酸酶的活性，维持染色质的正常结构和活性。

如将此种细胞核保存在等渗（0.25M）蔗糖溶液中（内含微量钙离子，防止核聚集和脆性），可以比较好地保存其完整的正常结构。

在此条件下离心分离得到的是细胞核的粗制品，如离心时通过0.88M蔗糖的高渗溶液。

适当调整离心力，可得到纯化的细胞核沉淀。

3.脱氧核糖核酸的鉴定：
【操作步骤】
1、0.5g肝组织＋5ml的1.5%柠檬酸溶液，研磨
2、肝匀浆，倾入离心管，离心：3000r/min；15′
3、离心结束后，上清液移入另外一个试管中备用（此为细胞质液）
4、沉淀中加入1ml的0.25mol/L 蔗糖-柠檬酸溶液，玻棒搅匀后，
为核悬液。

5、另外取离心管一只，加9ml 的0.88mol/L蔗糖-柠檬酸液。

用滴
管吸取核悬液。

沿管壁缓慢铺于液面上。

6、离心：2000r/min；10′.上层液，弃去；沉淀为初步纯化的细
胞核。

7、核洗液5ml洗涤沉淀，离心：2000r/min，10 ′白色沉淀为纯
化的细胞核。

8、加10ml 0.02mol/L NaOH溶解细胞核，即为待测的核液。

9、脱氧核糖核酸的鉴定
（1）水解：取离心管二支，编号，按下表操作
混合各管
沸水浴(10’)
离心
3000r/min;5′
上清液
(2)鉴定：取试管三支，编号，按下表操作:
混合各管
沸水浴(15’)
冷却
比较各管颜色(595nm) 编号 1 2
细胞质（ml） 2.0 -
核液（ml）- 2.0
1M过氯酸(ml） 2.0 2.0
[结果分析]
标准曲线法：分别计算细胞质和细胞核中的含量。

注意：样品中DNA含量（ug/g）=水解液中DNA含量x稀释倍数。