实验项目：细胞核的分离与鉴定
实验原理：
分离细胞核的可用方法有吸出法、原生质体破裂法、差速离心法排和排除法。

差速离心法是根据细胞内各种细胞结构的比重和大小不同，因而在同一离心场内的沉降速率不同从而将细胞内的结构分级分离出来。

本实验就采用差速离心法。

细胞核的鉴定，因为细胞核中主要含DNA，而DNA是碱性蛋白，可用甲苯胺蓝染液可使细胞核内碱性蛋白呈现出来。

实验器材：显微镜，普通离心机，离心管，滴管，玻璃漏斗，纱布，烧杯，解剖剪，镊子，玻璃匀浆器，载玻片/盖玻片，染色盘架，小白鼠肝脏。

实验试剂：甲苯胺蓝染液，蒸馏水，0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液，生理盐水
实验步骤：
（1）、用颈椎脱臼法处死小白鼠，迅速解开其腹腔取出肝脏，去出结缔组织，剪成小块，尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中。

反复洗涤尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。

（2）、将湿重为1g的肝组织放入烧杯中，用量筒取8ml预冷的0.25mol/L 蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液，先加少量溶液于烧杯中，尽量剪碎肝组织后全部加入。

（3）、将剪碎的肝组织导入匀浆管中，使匀浆器下端侵入盛有冰块的器血
中，左手持，右手将匀浆捣杆垂直插入管中，上下转动研磨3-5次。

用3层纱布过滤于匀浆管中，然后制备一张涂片①，自然干燥。

（4）、将装有滤液的离心管配平后，放入普通离心机以2500r/min离心15min,弃去上清液。

（5）、用6mol 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液悬浮沉淀物，以2500r/min离心15min 弃去上清液，将残留液体用气管吹成悬液，滴一滴于干净的载盖玻片上，制成涂片②，自然干燥。

（6）在①·②上滴加甲苯胺蓝染液，染色5-7min，洗涤干燥后镜检。

⑺记录观察结果
注意事项：
（1）尽可能充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。

（2）将匀浆液置于蔗糖溶液上层时要沿管壁小心加入，同时及时离心，以防止浆液中的颗粒自然下沉过快，影响后面的离心分层效果。

（3）涂片制作过程中把握好涂片的力度，不可太厚。

（4）染色后的洗涤要注意时间，不可过长，避免将染色洗去，观察不到细胞核。

（5）开腹取出肝后，用生理盐水反复冲洗，避免血细胞对食盐的影响。

预期结果：
在低、高倍镜下，可以观察到经.0.1%碱性固绿染色的小白鼠肝细胞的细胞核体被染成绿色。

说明这是碱性蛋白，即细胞核已游离出来。

涂片在高倍镜下可见肝细胞核已游离出来，被染成蓝紫色、圆形、中央有
2—4个甚至更多个深蓝色的核仁。

细胞核呈紫红色，上面附着少量胞质及浅蓝色碎片。