2 定性鉴别
取本品2 g,研细,加甲醇20 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液。
另取缺三七的阴性对照品 2 g,同法制成阴性对照品溶液。
再取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品,分别加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照液各2 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105 ℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品相应的位置上,显红色的斑点,而阴性对照液无相应斑点。
3 含量测定
3.1 色谱条件
Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(18∶82)；流速：1.0 mL/min；检测波长：203 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。
理论塔板数按三七皂苷R1计算应不低于3 000。
3.2 对照品溶液的制备
分别精密称取人参皂苷Rg1和三七皂苷R1对照品适量,加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg1 0.396 mg和三七皂苷R1 0.092 mg的混合溶液,摇匀,即得。
3.3 供试品溶液的制备
取本品适量,研细,取约1.2 g,精密称定,加水适量使溶解并转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇萃取3次,每次20 mL,合并正丁醇萃取液,加氨试液洗涤2次,每次20 mL,弃去氨试液,正丁醇层蒸干,残渣加甲醇溶解并移入10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.45 μm滤膜滤过,作为供试品溶液。
3.4 空白试验
按处方及制备工艺制备不含三七药材的阴性样品,再按供试品溶液的制备方法制备并测定。
按照上述色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL,分别注入色谱仪,进行测定。
结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,分别有相同保留时间的色谱峰,而阴性对照在此保留时间无干扰(见图1)。
因此,可在此系统条件下对人参皂苷Rg1和三七皂苷R1进行定量分析。
3.5 线性关系的考察
精密称取人参皂苷Rg1对照品31.4 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,作为人参皂苷Rg1对照品贮备液(0.628 mg/mL)。
分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL,分别置于10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成浓度分别为0.062 8、0.188 4、0.314 0、0.439 6、0.565 2 mg/mL的溶液。
分别精密吸取10 μL,注入液相色谱仪,记录峰面积。
以人参皂苷Rg1对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝209.713X－0.260,r＝0.999 8,人参皂苷Rg1在0.628～5.652 μg范围内呈良好的线性关系。
精密称取三七皂苷R1对照品7.75 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,作为三七皂苷R1对照品贮备液(0.155 mg/mL)。
分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL,分别置于10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成浓度分别为0.015 5、0.046 5、0.077 5、0.108 5、0.139 5 mg/mL的溶液。
分别精密吸取10 μL,注入液相色谱仪,记录峰面积。
以三七皂苷R1对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝208.065X－2.85,r＝0.999 8,三七皂苷R1在0.155～1.395 μg范围内呈良好的线性关系。
3.6 精密度试验
取对照品溶液,重复进样6次,测定峰面积,人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的RSD分别为
0.56%和0.69%,表明精密度良好。
3.7 重复性试验
取同一批号(030102)的田七颗粒,共6份,按“3.3”项制备,进样,测定峰面积,人参皂苷Rg1平均含量为3.708 mg/g, RSD＝1.01%；三七皂苷R1平均含量为0.698 mg/g,RSD＝0.92%。
3.8 稳定性考察
精密吸取同一供试品溶液,分别于制备后12 h内每隔2 h进样1次,测定峰面积,人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的RSD分别为1.52%和1.47%,表明样品溶液在12 h基本稳定。
3.9 加样回收率测定
取已知含量的样品(人参皂苷Rg1含量3.708 mg/g和三七皂苷R1含量0.698 mg/g)6份,精密称定,分别精密加入人参皂苷Rg1对照品贮备液4.5 mL和三七皂苷R1对照品贮备液3.5 mL,挥干甲醇后,按供试品溶液的制备方法制备,根据上面色谱条件测定峰面积,计算回收率,结果见表1、表2。
表1 人参皂苷Rg1加样回收率试验结果（略）表2 三七皂苷R1加样回收率试验结果（略）
3.10 样品测定
分别精密吸取10 μL对照品溶液和供试品溶液,按上述色谱条件,注入色谱仪,测定,结果见表3。
表3 样品测定结果（略）。