肠出血性大肠杆菌（EHEC）PCR检测试剂盒
PCR快速检测试剂盒 --快速微生物检测试剂盒
目前，国内食品卫生微生物检验的方法主要采用国家标准（GB/T）和行业标准（SN/T），该类标准是由传统的分离培养、镜检观察、生化鉴定等实验组成，一般的检测周期在6～8 天，要求检测步骤较多而且精度低，存在着检验周期偏长、工作量大等缺点。

临床上对致病菌检测也需要快速得到检测结果，以免延误病情。

针对目前微生物检测的现状，天津生物芯片结合目前微生物研究领域的先进技术，成功开发了基于PCR技术的微生物PCR快速检测试剂盒。

样品经过12-24小时增菌后即可进行检测。

PCR检测试剂盒中包含DNA提取试剂和检测所需的全部试剂，客户仅需准备好样品即可完成检测。

增菌后从收集细菌到检测完成不超过3.5小时，大大缩短客户的检测周期。

每种细菌检测试剂盒均有实时荧光定量PCR和普通PCR两种，客户可以根据实验室配置进行选用。

检测敏感度可达1-10cfu/ml。

试剂盒组成：
核酸提取液1ml/支 2支
PCR反应液500μl /支 1支
Taq酶 12μl /支 1支
阳性对照品 100μl /支1支
阴性对照品100μl /支1支
【产品名称】
通用名称：肠出血性大肠杆菌（EHEC）核酸扩增（PCR）检测试剂盒-aap
英文名称：Nucleic acid amplification (PCR) diagnostic kit for EHEC aap
【包装规格】
20次/盒
【预期用途】
用于食品、水样、临床样品以及环境样品中的肠出血性大肠杆菌（EHEC）aap的检测。

【检验原理】
试剂盒使用肠出血性大肠杆菌（EHEC）的aap特异引物，可与样本中的肠出血性大肠杆菌（EHEC）基因组的aap基因相应靶位点特异性结合，利用PCR反应达到对肠出血性大肠杆菌（EHEC）aap基因快速检测的目的。

试剂盒具有特异性强的特点，可以将肠出血性大肠杆菌（EHEC）aap特异地区分出来。

【主要组成部分】
肠出血性大肠杆菌组份规格数量贮存温度
（EHEC ）核酸扩增（PCR ）检测试剂盒
-aap
核酸提取液
1ml/支 2支 -20℃
大肠杆菌EHEC PCR 反应液-aap 450μl /支 1支 Taq 酶
12μl /支 1支 大肠杆菌EHEC 阳性对照品-aap 15μl /支 1支 阴性对照品
100μl /支
1支
【储藏条件及有效期】
-20℃保存，避免反复冻融，有效期一年。

【样品处理】
（1）取培养后的菌液约1.5ml ，12000rpm 离心2min ，弃上清。

（2）加入200μl 无菌水，充分混匀，12000rpm 离心2min ，弃上清。

（3）加入80μl 裂解液，用移液器吹吸混匀，50℃水浴1小时，100 ℃水浴15分钟，冰上放置
10分钟后12000rpm 离心3min 。

（4）取上清液用于PCR 检测。

【使用方法】
1. 试剂配制（试剂准备区）
从试剂盒中取出PCR 反应液在室温融化，将PCR 反应液充分震荡混匀，所有试剂在使用前2000rpm 离心10s 。

设所需要的管数n （n=样本数+1管阴性对照品），每个测试反应体系试剂配置如下表。

计算所需要的n 管反应的各试剂的使用量，加入至适当体积的无菌离心管中，充分混合均匀，分装至无菌PCR 反应管中，每管19μl 。

PCR 反应液 Taq 酶 每个反应体系试剂用量
18.8μl
0.2μl
2. PCR 扩增（扩增和产物分析区）
将样本、阴性对照品使用前恢复至室温，2000rpm 离心10s 。

向每个PCR 反应管中分别加入样本、阴性对照品各1μl ，震荡混匀，于2000rpm 离心10s 。

将PCR 管放入PCR 仪中，使用以下程序进行扩增反应，整个扩增反应约需2小时‘
3. 结果判断（扩增和产物分析区）
从PCR 管中取出2μl PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。

在紫外灯下，阴性对照品没有任何条带。

大肠杆菌EHEC 阳性对照品-aap 具有大小为356bp 的条带。

当被检样品经电泳检测出现356bp 大小的条带时则属于肠出血性大肠杆菌（EHEC ）-aap 阳性；当未出现条带或所出现的条带大小与阳性对照品的条带大小不一致时均视为阴性结果。

【注意事项】
1. 本试剂盒不做临床诊断。

2. 实验室管理应严格按照PCR 基因扩增实验室的管理规范，试验人员必须进行专业培
训，实验过程中严格分区进行（试剂准备区、样本制备区、扩增和产物分析区），实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区用品不能交叉使用。

3. 样本准备和试剂准备阶段应使用生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，
使用自卸管移液器。

4. 对每次实验进行质量控制。

5. 试剂使用前要完全解冻，并混合均匀，但应避免反复冻融。

6. 样本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢
弃。

7. 实验完毕用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器。

8. 所有检测样品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微
生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。