作业2:蛋白质的离子交换柱层析原理:
蛋白质由氨基酸组成,不同的氨基酸是具有不同的等电点的,因此每个蛋白质都具有等电点,不同的蛋白质,其等电点也不相同。
这个决定了在同一pH下,蛋白质所带的电性和电荷量是有差异的,比如在pH在7.0的情况下,有些蛋白质带正电,有些蛋白质带负电,有些蛋白质不带电;在带正电的蛋白质中,不同的蛋白质所带的电荷量也是不同的,带负电的蛋白质也是如此。
即使假设存在两种蛋白质所带的在同一pH下所带的电性和电荷量都相同,不同的蛋白质的分子量以及其折叠而成的空间结构决定了这两种蛋白质的表面电荷密度也是不同的。
以上论述的结论就是每一种蛋白质在同等条件下都有唯一的特征常数。
蛋白质的离子交换柱层析正是利用了这个蛋白质的特征设计的。
蛋白质离子交换层析在以离子交换剂为固定相,液体为流动相的系统中进行的。
蛋白质的特征常数决定了在相同pH下蛋白质与离子交换剂的亲和力是唯一的。
也就是说,在某一pH值的溶液中,不同的蛋白质所带的电荷密度存在差异,因而与离子交换剂的亲和力就有区别。
当洗脱液的pH改变或者盐的离子强度逐渐提高时,使某一种蛋白质的电荷被中和,与离子交换剂的亲和力降低,不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来,从而达到分离的目的。
离子交换层析具有浓缩效应,可以实现低浓度蛋白质的提取,这是非常具有实际意义的。