• 要求
缓冲间需3-5平方米，应保持清洁无菌； 有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服； 1-2盏紫外灯定时照射，对衣物及空间进行灭菌。
３、无菌操作室（接种室）
•功能
外植体消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原 生质体的制备等
•要求
环境干爽，清洁，居于上风位 空间宜小不宜大 地面、天花板及四壁密闭光滑，无卫生死角 室内物品越少越好，尽可能减少空气流动
达到严格无菌的条件
组培的常见技术路线： 外植体→愈伤组织→不定芽→生根→再生植株
基本的工艺流程： 容器具洗涤，物质准备→配置培养基并灭菌→外 植体消毒与无菌操作接种→观察、记录、处理 （脱分化、再分化、继代） →再生植株
➢标准的组培实验室 洗涤室、准备室、无菌室、培养室、观察室 等 ➢基本组培实验室 准备室（含配药室）、缓冲间、无菌操作室 、培养室
酒精灯、镊子、解剖刀，解剖刀片、剪刀、培养瓶，刀剪架等
４、培养室
• 功能
接种的材料进行培养生长的场所（其设计以充分利 用空间和节省能源为原则）。
• 要求：
• 能控制光照和温度 • 保持相对的无菌环境 • 有排风窗和换气扇等培养室的换气装置 • 有适宜的培养架，日光灯照明。
• 主要设备
• 培养架、培养箱、空调机、除湿机、换气扇、臭氧 发生器等。
•维护方法
定期消毒（紫外线照射、气雾熏蒸、药品喷洒） 及时维护（干燥、洁净）
接种室主要设备及用具
• 接种箱
主体为玻璃箱罩、入口有袖罩
• 超净工作台
操作台面半出，大 于0.03um直径的微生物很难在工作台的操作空间停留
• 解剖镜
分离微茎尖、转基因等
• 无菌操作用的器具
植物组织培养实验室的构建与 操作技术
第一节 植物组织培养实验室及主要设备
一、实验室设计与设备
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工 作方便，防止污染。
• 实验室的大小应取决于工作的目的和规模 • 按组织培养流程来设计，避免某些环节倒排，引
起日后工作混乱 • 利用一定的设备、器材和特殊的实验室结构设计，
➢除C、H、O外，其它矿质元素通常以一定浓度的 无机化合物形式，按一定比例配制而成，溶于水中 以离子态被吸收
➢N有硝态氮KNO3和铵态氮(NH4)2SO4两种形式（一 般NH4—N对植物生长较为有利）。
微量元素
• 浓度小于0.5mmol／L的元素，有 Fe、Cu、 Zn等。
• 铁盐在合成叶绿素中起重要作用，缺铁影响 到胚的发育，阻碍子叶变绿。
一．培养基成分
主要为： 水 无机盐 有机化合物 生长调节物质 培养体的支持材料
１．水
➢ 水是植物体的重要组成成分，是一切代谢过程 的介质和溶媒，是生命活动过程中不可缺少的 物质。
➢ 培养基大部分是水（固体培养基 约75—80%）
➢ 天然水或自来水不能直接用于培养基配制
➢ 原生质体培养、细胞培养及分生组织培养一般
3.有机化合物(organic compound)
[基本培养基（只含有大量和微量元素）]
为使培养物的生长更好，还需添加各种有机成分： 糖类、维生素、醇类、嘌呤、氨基酸等
（１）糖类（碳水化合物 ）
碳源，维持培养基的渗透压在1.5-4.1MPa。多使 用蔗糖。
不同浓度会影响细胞的增殖分化，试管苗生长与繁殖浓度2-3%，幼胚 培养4-6%，某些特殊培养中用8-10%。
第二节 培养基及其配制
定义：
培养基(culture medium)——根据植物生长所需 营养成分，配制成的供植物生长的人工制作的营养物 质。是植物组织培养的重要基质。
•不同植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部 位的组织对营养的要求也不相同 •没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官 •找到一合适的培养基，是培养成功的基础。
细胞和原生质体培养还用麦芽糖、葡萄糖、果糖
应用双蒸水或超纯水。
•保持母液及培养基成 分的精确性
➢ 大批量快速繁殖培养，可用单•质防蒸止水贮或藏过纯程净发水霉。变
２．无机盐类(inorganic element）
离体组织生长发育的基本成分，根据 植物对必需元素需要的量，可以分为： ➢大量元素 ➢微量元素
➢大量元素
➢指植物所需元素的浓度大于0.5mmol／L的元素， 有C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。
1、准备室（化学实验室）
• 功能：进行一切与实验有关的准备工作
• 器皿洗涤、药品的配制 • 培养基配制与分装 • 培养基和培养器皿的灭菌 • 培养材料的预处理等
• 要求：
• 明亮、通风 • 便于多人同时工作 • 地面应便于清洁，并应进行防滑处理
准备室主要仪器设备：
(1)工作台 (2)药品柜 (3)冰箱
(5)恒温水浴锅 (6)蒸馏水发生器
蒸馏水用于配制母液或培养基（普通实 验可以用自来水代替蒸馏水） (7)电炉 (8)高压灭菌锅 进行培养基、水和器械用具的灭菌
不锈钢蒸馏水器（单蒸水）
(9)酸度计 测定培养基及酶制剂的pH值（普通实验可使 用pH试纸）
(10)烘箱 干燥洗净的玻璃器皿，也可用于干热灭菌
和测定干物重
(11)摇床 振荡培养
(12)离心机 分离培养基中的细胞以及解离细胞壁后的原
生质体
PHS-802中文台式酸度计
通用型或经济型酸度计
全多 温振 型幅 恒高 温速 培轨 养道 摇摇 床床
２、缓冲室（注意门的朝向）
• 工作人员在此换上工作服、拖鞋，戴上口罩 • 功能
减少人体从外界带入的尘埃等污染物。
小型臭氧发生器
二、培养器皿及用具
1、培养器皿（包括玻璃器皿和塑料器皿） 各种规格的培养皿、三角瓶、试管、培养瓶。
2、微孔过滤器（细菌过滤器） 0.45微米，抽滤灭菌用，如激素
3、器械用具 镊子、剪刀、解剖刀、接种针（铲）等。
思考题
• 1、一个正规的组织培养实验室应具备哪 些房间？
• 2、组织培养常用的设备有哪些？各有何 用途？
普通冰箱、低温冰箱等。主要用于贮存母液、 各种易变质、易分解的化学药品以及植物材料 等。 (4)天平
感量0.001g的分析天平、感量0.0001g的电子 天平（用于称量微量元素和一些较高精确度的 实验用品）、感量为0.1g的托盘天平（用于称取 用量较大的糖和琼脂等） 放置在水平、干燥、不受震动的操作台上