实验一苯酚降解菌的分离及降解性测定
实验原理：在污染环境中，大部分微生物由于受到毒害而死亡，少数微生物具有较强的降解能力或通过诱变改变其基因型或诱导产生某些酶而能在污染的环境中存活，成为有机污染物的高效降解菌或耐性菌株。

从污染环境中取样，通过在选择性培养基上培养，可筛选出目的性微生物。

本实验取青年湖水样作为菌种的来源，在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基进行培养，分离苯酚降解菌。

实验步骤：
1. 从污染地区取样品（污水，污泥或受污染的土壤）。

2. 配制无碳源的无机盐培养基，加入苯酚储备液，使培养基中苯酚浓度达100 mg/L。

121℃灭菌20 min。

3. 吸取1 ml活性污泥，加入灭菌培养基，同时做空白对照，28℃恒温摇床培养24 h（160
rmp/min）.
4. 测定苯酚降解率。

苯酚降解率的测定方法：
a.标准曲线的绘制分别吸取0、1、2、3、4、5mL 酚标准溶液（100 mg/L）
于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释成20 mL。

加入2 mL pH9.8缓冲溶液，4 mL
4％4－氨基安替比林溶液，摇匀后加入4 mL 8％铁氰化钾溶液，显色10min
后，加蒸馏水稀释至刻度。

用722型分光光度计460nm波长处比色测定。

b.以不加酚的试剂作空白对照，以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标绘制标准
曲线。

c.培养液中苯酚降解率的测定吸取培养液2mL于50mL容量瓶中，加蒸馏水
稀释成20 mL。

加入2 mL pH9.8缓冲溶液，4 mL 4％4－氨基安替比林溶液，
摇匀后加入4 mL 8％铁氰化钾溶液，显色10min后，加蒸馏水稀释至刻度。

用722型分光光度计460 nm波长处比色测定。

d.根据标准曲线求出苯酚含量以分解苯酚的百分数表示酚分解作用强弱。

附：无机盐含酚培养基
KH2PO40.5g
K2HPO40.5g
MgSO4•7H2O 0.2g
CaCl2 0.1g
NaCl 0.2g
NH4NO3 1.0g
FeCl210%溶液1滴
苯酚100mg/L
水1000mL
调pH 值7.5，121℃灭菌20min。

结果与报告：
根据降解菌的有无及降解能力强弱，对取样点水质受污染状况进行分析。