因缺陷的细胞中，以表达 临床实验
治 表达
出正常性状来治疗
疗
基 碱基 制作特定 DNA 探针与病 因 互补 人样品 DNA 混合，分析杂 临床应用 诊 配对 交带情况
断
考点二 基因工程的操作与应用
易错警示
规避与基因工程操作有关的 7 个失分点 (1)目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动 子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终 止子之间的部位。
（4）目的基因的检测和鉴定
是否出现 杂交带
是否出现 是否出现 杂交带 杂交带
是否抗虫； 是否抗病
考点二
基础回扣
要点探究
命题设计
返回
考点二 基因工程的操作与应用
2．探究目的基因导入不同受体细胞的过程
生物种类 植物
动物
微生物
农杆菌 显微注射 感受态细
常用方法
转化法 技术
胞法
பைடு நூலகம்体细胞或
受体细胞
受精卵
受精卵
考点二
基础回扣
要点探究
命题设计
返回
考点二 基因工程的操作与应用基因 PCR启动子标记基因
农杆菌转化法 花粉管通道法
显微注射
考点二
基础回扣
要点探究
命题设计
返回
考点二 基因工程的操作与应用
DNA 分子杂交 分子杂交 抗原—抗体杂交 个体生物学水平
考点二
基础回扣
要点探究
命题设计
返回
考点二 基因工程的操作与应用
原核细胞
考点二
基础回扣
要点探究
命题设计
返回
考点二 基因工程的操作与应用
转化过程
将目的基因插 将含有目的
Ca2＋处理细胞
入到 Ti 质粒 基因的表达
→感受态细胞
的 T-DNA 上 载体提纯→
→重组表达载
→农杆菌→导 取卵(受精
体 DNA 分子
入植物细胞→ 卵)→显微注
与感受态细胞
整合到受体细 射→受精卵
考点一 基因工程的概念和基本工具
二、DNA 重组技术的基本工具
1．限制性核酸内切酶(简称： 限制酶 ) (1)来源：主要是从 原核 生物中分离纯化出来的。 (2)作用：识别特定的 核苷酸序列 并切开相应两个核苷酸之 间的 磷酸二酯键。 (3)结果：产生 黏性末端 或平末端。
考点一 基因工程的概念和基本工具
考点一
基础回扣 要点探究 命题设计 技法提炼 返回
考点一 基因工程的概念和基本工具
技法提炼 与DNA有关的酶的比较
限制酶
作用底物 DNA 分子
DNA 连接酶 DNA 片段 DNA 聚合酶 脱氧核苷酸 DNA 解旋酶 DNA 分子
DNA(水解)酶 DNA 分子
作用部位 磷酸二酯键
磷酸二酯键 磷酸二酯键
二、DNA 重组技术的基本工具 2．DNA 连接酶
(1) 种 类 ： 按 来 源 可 分 为 E·coli DNA 连 接 酶
和 T4DNA 连接酶。
(2)作用：将双链 DNA 片段“缝合”起来，恢复被限制酶切
开的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键。
考点一 基因工程的概念和基本工具
3．载体 (1)种类： 质粒 、λ 噬菌体的衍生物、动植物病
考点一 基因工程的概念和基本工具
一、基因工程的概念
1．供体：提供 目的基因。 2．操作环境： 体外。 3．操作水平： 分子 水平。 4．原理： 基因重组 。
5．受体：表达目的基因。
6．本质：性状在 受体 体内的表达。 7．优点：克服远缘杂交不亲和的障碍，定向改造生物的遗传性状 。
考点一
基础回扣 要点探究 命题设计 技法提炼 返回
毒等。
能自我复制
(2)质粒的特点 有一个至多个 限制酶切割位点 有特殊的 标记基因
(3)载体需具备条件：
条件 稳定并能自我复制
意义
目的基因稳定存在且数量
有一个至多个限制酶切割位点 携带外源基因进入受体细胞
具有特殊的标记基因
便于重组 DNA 的鉴定和选择
考点一 基因工程的概念和基本工具
1．下图为限制酶和 DNA 连接酶的关系，据图回答：
混合→感受态
胞染色体的 发育→获得
细胞吸收 DNA
DNA 上→表 具有新性状
分子
达
的动物
考点二
基础回扣
要点探究
命题设计
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考点二 基因工程的操作与应用
2．应用：培育转基因植物和 转基因动物 ，生产基因工程药 物，进行 基因 治疗。
基因治疗与基因诊断的不同点
原理
操作过程
进展
基 因
基因
利用正常基因 导入有基
碱基对间 的氢键
磷酸二酯键
形成产物 黏性末端或
平末端 重组 DNA
分子 子代 DNA 形成脱氧核 苷酸单链 游离的脱氧
核苷酸
考点一
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考点二 基因工程的操作与应用
1．操作步骤：获取目的基因→ 构建基因表达载体 → 将目 的基因导入受体细胞 → 目的基因的检测与鉴定 。
考点一
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考点一 基因工程的概念和基本工具
易错警示
(6)限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标 记基因，以便进行检测。 (7)基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不 同。基因工程中的载体是 DNA 分子，能将目的基因导入 受体细胞内；膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。 (8)基因工程中有 3 种工具，但工具酶只有 2 种。
(2)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞) 没有碱基互补配对现象。
(3)原核生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传 物质相对较少。 (4)转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。
考点二
基础回扣
要点探究
命题设计
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考点二 基因工程的操作与应用
(1)基因工程中，构建基因表达载体的目的是使__目__的__基__因__在__受_ _体__细__胞__中__稳__定__存__在__，__能__遗__传__给__后__代__，__并__表__达__和__发__挥__作__用___。 (2)限制酶 EcoRⅠ的识别序列和切割位点是—G↓AATTC—， SmaⅠ的识别序列和切割位点是—CCC↓GGG—。图中目的基 因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应
(1) 限 制 酶 和 DNA 连 接 酶 的 作 用 部 位 相 同 吗？ 相同 。 (2)DNA 连接酶起作用时是否需要模板？ 不需要 。
考点一
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考点一 基因工程的概念和基本工具
易错警示
巧辨基因工程操作基本工具的 8 个易错点 (1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。 (2)限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件， 高温、强酸或强碱均易使之变性失活。 (3)在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶，目的是产生相 同的黏性末端。 (4)将一个基因从 DNA 分子上切割下来，需要切两处，同时产生 4 个黏性末端。 (5)不同 DNA 分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同 一个 DNA 分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端一般不相同。