需要 哪两种
工具
总结：表达载体需由哪几部分组成
复制原点 启动子 目的基因 终止子 标记基因
它们的作用是？
第三步：将目的基因导入受体细胞
什么叫转化
常用的转化方法有哪些？
将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞
具体过程？
将目的基因导入微生物细胞
第四步：目的基因的检测与鉴定
首先：
检测与鉴定哪些环节
单链DNA
核酸酶H
单链DNA
复制
?Leabharlann 双链DNA第一步：获取目术合成DNA
3. mRNA差异显示法获得目的基因 （反转录） 4.采用DNA合成仪人工合成长度不是很大的
DNA片段。 5.用机械的方法，如超声波把打成片段。
原核生物基因表达的调 控
识别序列的特点
③结果：产生黏性未端和平末端
两者的区别
④举例：EcoR1限制酶、Sma1限制酶
这两种酶切的特点
限制酶的识别特点
以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列
如：GAA TTC
CTT AAG
CCC GGG GGG CCC
（2）DNA连接酶
与DNA聚合酶 相同吗
①连接的部位：磷酸和脱氧核糖之间的键： 磷酸二酯键（梯子的扶手）
基因的剪刀（分子手术刀） ——限制性核酸内切酶（限制酶）
到哪里去寻找这种酶
基因的针线（分子缝合针） ——DNA连接酶
基因的运输工具（分子运输车） ——运载体
（1）限制酶
与我们学过的 DNA酶相同吗？
①分布：主要在原核生物中。
作用是什么
②作用特点:专一性，识别特定核苷酸序列， 切割特定切点。
切断的是什么键
1.2基因工程的 基本操作程序
为什么要获得目的基因 为什么要把目的基因 与载体结合 受体细胞是指什么
为什么要进行检测
第一步：获取式图
通过对 受体菌的 培养而 储存基因
第一步：获取术合成DNA
（3）在 70℃ 高温下，合成一条与模板 DNA 单链（正
链或负链）互补结合的DNA新链。
高温 DNA 聚合酶
酶
原料
（Taq 酶），
四种脱氧核苷三磷酸（4 X dNTP)
（4）以上三个步骤周而复始，即反应体系的温度从 90oC- 50oC- 75oC，目的基因的量不断增加
反应体系中经历：变性——淬火——合成——重复 。
②结果：两个相同的未端的连接。
③举例：E·coli DNA连接酶
T4 DNA连接酶
二者在性质 上的区别
（3）运载体
①作用：将外源基因送入受体细胞。
②具备的条件：
为什么 要具备 这些条件
能在宿主细胞内复制 并稳定地保存。 具有多个限制酶切点。 具有某些标记基因
对受体细胞无害
③举例：质粒、噬菌体 和动植物病毒。
其次： 最后：
具体 方法？
还要：
DNA分子杂交技术
基因探针：核酸分子探针是指特定的已知核酸 片段，能与互补核酸序列退火杂交，用于对待 测核酸样品中特定基因顺序的探测。
满足：（1）必须是单链，（2）带有容易 被检测出来的标记物。
编码区上游
原核细胞
编码区下游
调控
RNA聚合 酶结合位点
编码 蛋白质
乳糖代谢基因表达调控图解：(有乳糖时)
调节基 因 启动 子 操纵基 因
结构基 因
Ｒ
转录
Ｐ
Ｏ
RNA聚合酶
lacZ
lacY
lacA
转录
信使 RNA 翻译
阻抑 物
乳糖 半乳糖苷酶
酶
酶
阻抑物与乳糖结合后构象发生了改变，因而不能与 操纵基因结合，使得结构基因进行转录。
核心 第二步： 基因表达载体的构建
目的基因与载体结合成为重组基因
专题1 基因工程
基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。 是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪
切” 和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组 合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因 在受体细胞内表达，产生出人类所需要的新的生物类
型和生物产品
基础理论 和技术的发展 催生了基因工程
阅读课本第2页
PCR:聚合酶链式反应.是以DNA变性、复制的
某些特性为原理设计的. 前提条件是必须对目的基因有一定的了解，
需要设计引物。
PCR原理图
PCR的过程
（1）以DNA 片段作模板，在 90℃ 高温下，分开成
为 单链DNA。
高温的作用是？
引物是怎样获得的？
（2）以DNA 小段寡聚核苷酸做引物，在 50℃ 的温度 下，找到可以配对的正链和负链，形成互补结合
抗逆转基因植物 抗冻蛋白基因
鱼
抗除草剂基因
转基因玉米
富含赖氨酸的蛋白质编码基因
转基因延熟番茄 控制番茄果实成熟的基因
转基因矮牵牛 植物花青素代谢有关的基因
转基因鲤鱼
外源生长激素基因
人
转基因牛
肠乳糖酶基因
人
转基因牛（羊） 抗凝血酶基因、血清白蛋白基 因、生长激素基因、a-抗胰蛋 白酶
转基因烟草
发光基因
结果：目的基因的量成指数形式扩增（2n)
第一步：获取术合成DNA
3. mRNA差异显示法获得目的基因 （反转录）
由mRNA反转录形成cDNA
mRNA DNA单链
逆转录
?
形成氢键
DNA单链 RNA – DNA杂交分子
使RNA降解
RNA – DNA杂交分子
1.1 DNA重组技术的基本工具
分析概念：
为什么 要加工
是在生物体外，通过对DNA分子进行人工
工 “剪切” 和“拼接”，对生物的基因进行 具 改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行
无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，
产生出人类所需要的新的生物类型和生物产
品
用什么
什么是 表达
导入
基因操作的工具
RNA聚合 酶结合位点
真核真核细胞
调控
1、3 基因工程的应用
转基因生物 抗虫植物 （如：抗虫 棉）
抗病植物 （如：转基 因烟草）
目的基因 Bt毒蛋白基因 蛋白酶抑制剂基因 淀粉酶抑制剂基因 植物凝集素基因 病毒外壳蛋白基因 病毒的复制酶基因 几丁质酶基因
目的基因来源 苏云金芽胞杆菌 植物
请继续把表格完成
萤火虫
工程菌 基因治疗
细胞因子、抗体、疫苗、 激素、白细胞介素-2、干 扰素、乙肝疫苗
腺苷酸脱氨酶基因
功能正常的基因
反义基因
自杀基因
器官移植的供体 被导入某种调节因子的器
动物
官供体基因组
1、4蛋白质工程的崛起
蛋白质工程的概念
是研究蛋白质的结构及结构与功能的关系，然后人