性能 快速 中速 慢速 快速 中速 慢速
C. 滤纸的处理
以0.1 ~ 0.4 mol/L HCl (或 2 mol/L HAc)浸 泡数小时, 除去无机杂质后, 取出用蒸馏水 洗净, 再将滤纸放在丙酮-乙醇( 1 : 1 )中浸泡
一周时间, 除去有机杂质, 再取出风干备用.
固定相 纸层析－以吸着在纤维素上的水作固定相。 反相纸层析－用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙 二醇等作固定相。 若分离芳香油等非极性物，以石蜡油、硅油 作固定相。
若前后二次展 开剂选择适当， 可使各种组份完 全分离。例如， 氨基酸的分离可 用此法。双向展 开法也可以二次 使用同一种展开 剂展层。
D. 显色
展层后，将滤纸从层析缸中取出，用铅笔在溶剂 前沿作记号 a. 有色物：直接观察各个色斑 b. 无色物： 物理法显色：用紫外灯照，观察有无吸收或发 出各种不同颜色的荧光斑点，并用铅笔画下斑 点的位置及大小。
(2). 试样 A.试样的溶解 尽量避免用水。一般用乙醇、丙 酮、氯仿等，最好采用与展开剂极性相似的溶剂。 液体样，直接点样。
Ｂ．点样方法 a先用铅笔在距纸条一端2 ~ 3 cm处划一条直线（ 起始线）并在线上隔一定距离划一“x”号表示点 样位置；见下示意图：
b.点样工具：微量注射器、毛细滴管（Φ＝0.5 mm) ； c.点样方法：用点样工具吸取试液轻轻与“x”号
y
x
y
x
Rf的计算
Rf的大小取决于溶质在二相间的分配系数 及滤纸的性质. 不同的组分具有不同的分
配系数, 因而也就有不同的Rf. 这就是定
性的依据. 3. 影响Rf的因素 (1). 欲分离物的本性:物质在两相的分配系 数,决定了它的Rf大小;
(2). 层析溶剂:同一组分在不同溶剂中Rf不同。
通常应选这样的层析剂，使溶质的Rf在0.05 0.85之间,不同组分的Rf差值>0.05.
接触，使点样的斑点直径为0.2 ~ 0.5 cm, 每次点
样2 ~ 20 μl于滤纸上，以冷风吹干； d. 干后，将纸的两边用线缝好，以圆筒形式置于 层析缸中展开。
C. 展开
a. 展开剂
展开剂的选择：
欲分离物在两相中的溶解度；
展开剂的极性
展开剂与欲分离物间应无化学反应
欲分离物在展开剂中的分配系数最好不受温 度的影响 欲分离物在两相间的分配平衡瞬间达到
能不断地上升而挥发，
展层过程就自动连续
地进行；
c.
若溶剂沸点＞100oC，则可在纸条暴露部分 用红外灯烘烤，促使溶剂挥发；
d. 该法不能测量前沿，但可达分离的目的。
b.下行法
溶剂自纸的上端向下降（借助于重力的作用）， 具有分离速度快及连续挥发色谱的优点。
玻片 玻璃棒
原点
玻皿 剪成锯齿状，便于溶剂滴下
a. 上行法
将点有试样的滤纸条的 下端浸入溶剂（但不能浸没 点样处）上端固定在层析缸 的上部，保持垂直，将缸密 闭，使溶剂沿下端上升而展 层。待溶液上升到距离纸上
端3 ~ 4 cm 时，将滤纸取出，
用铅笔在溶剂前沿处画线作
记号（见右图）
对于 Rf 十分接近的物质可采取连续挥发的ห้องสมุดไป่ตู้谱法 a. 纸条的上端暴露在 层析缸外，以便令 上升的溶剂挥发； b. 只要保持纸条下端与 溶剂面接触，溶剂便
第四章 液相层析分离法
—层析法又称色层法
19世纪中叶已有人做过这 样或那样的色层分离实验,但系
统地研究和介绍色层分离法的,
一般公认最早的为波兰植物学 家M•茨维特。
按流动相分类
按原理分类
纸色层：滤纸吸附的水作固定相，有机溶剂作流 动相。
薄层色谱：把吸附剂粉末舖成薄层作为固定相。
本章仅讨论纸色层、薄层色谱法。
(3). pH:影响它们的存在状态
(4). 滤纸:质地均一、厚薄适当、具有一定机
械强度、不含杂质
(5). 温度:在层析缸中用红外灯照射。温度 会影响溶质的分配系数及流动相的扩散速度。 层析操作应在恒温下进行，温度不超过± 0.5oC (6). 展开方式:展开方式不同,Rf也不同。下 行法的Rf最大，上行法的Rf较小，环行法的 Rf 也不大。
第一节、纸色层
微量操作技术，简、分离效率高、但 分离速度慢 １、基本原理 纸色层－纸上萃取色谱，它和萃取一 样，它也是根据不同物质在两相间的分配 比不同而进行分离的（相当于逆流萃取）。
1 2 6
5
1.层析缸
2.滤纸
7 3 4 3
3.原点 4.展开剂 5.前沿 6.7.斑点
2. 比移值Rf 组份分离后,它们在滤纸上的 位置用比移值Rf表示. [定义]:
c.环行法
又叫径向色谱法。这是一种既快又方便的方法。取一张圆形 滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪刀沿这两根线剪至圆 心处，在纸的中央滴上试液，干后，将滤纸夹在两个大小相同 培养皿之间，使剪开的纸条的尾端浸入流动相。
d. 双向展开法
有时用一种溶剂不能将样品中组份分开时，可以试用双向展 开法。该法是用正方形或长方形滤纸，在纸的一角上点样，先用 一种展开剂朝一个方向展开，展开完毕，待溶剂挥发后，再用另 一种展开剂朝与原来垂直的方向进行第二次展层。
4. 操作技术 (1). 滤纸(担体) Ａ．滤纸的选择
a. 要求滤纸质地均匀、平整无折痕边缘整齐
b. 要求滤纸的纤维松紧适宜 c. 滤纸的杂质含量少
B. 层析滤纸的性能与规格
型 标重 厚度 吸水性( 30min 号 g /m2 (mm) 内水上升mm) 1 90 0.17 150 ~ 120 2 90 0.16 120 ~ 90 3 90 0.15 90 ~ 60 4 180 0,34 151 ~ 121 5 180 0.32 120 ~ 90 6 180 0.30 90 ~ 60 灰分 g /m2 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08
展开剂
水饱和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、 氯仿、苯、丁酮、丙酮、有机酸、有机碱，有时 也加入一定比例的无机酸、无机碱、甲醇、乙醇 等 b.展层方法：展层前，层析缸与已点样滤纸必须 予先经水蒸汽、溶剂蒸气饱和。方法：将溶剂和 水置于分液漏斗中充分振荡，分层后，将水层放 入小烧杯内，置于层析缸中平衡一段时间，使滤 纸吸饱蒸汽，然后移去小烧杯，将溶剂倒入溶剂 槽中，立即将点好样的滤纸的一端浸入溶剂槽内 展层。