紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成的混合物中各组分的浓度。

在这两种组分组成的混合物中，彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。

【关键词】紫外分光光度法；维生素C；维生素E；浓度
1、引言
维生素C（抗坏血酸）和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。

两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。

因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。

维生素C是水溶性的，维生素E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。

2、实验原理
根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。

由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对的方法来进行定量测定。

例如，当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。

混合组分中在λ1处的吸收等于组分A 和组分B 分别在λ1处的吸
光度之和A λ1
A+B ，即： A λ1A+B
=κλ1A bc A +κλ1B bc B
同理，混合组分在λ2处吸光度之和A λ2A+B 应为： A λ2
A+B
=κλ2A bc A +κλ2B bc B 若先用A 、B 组分的标样，分别测的A 、B 两组分在λ1和λ2处的摩尔吸收系数κλ1A 、κλ2A 、κλ1B 、κλ2B ；当测的未知试样在λ1和λ
1处的吸光度A λ1A+B 和A λ2
A+B 后，解下列二元一次方程组： A λ1
A+B
=κλ1A bc A +κλ1B bc B A λ2
A+B
=κλ2A bc A +κλ2B bc B 即可求得A 、B 两组分各自的浓度c A 和c B 。

c A =（A λ1A+B
·κλ2B −
A λ2A+
B ·κλ1B ）/（κλ1A ·κλ2B −κλ2A ·κλ1B ） c B =（A λ1
A+B
−κλ1A ·c A ）/κλ1B 一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ1和λ2宜分别选择在A 、
B 两组分最大吸收峰处或其附近。

3、紫外分光光度法测定维生素C 和维生素E 含量
3.1、仪器试剂
仪器：紫外-可见分光光度计（天津港东UV-4501S ），石英吸收
池一对
试剂：维生素C （抗坏血酸），维生素E(α-生育酚)，无水乙醇
3.2、实验步骤
3.2.1、 检查仪器
开机预热20min ，并调试至正常工作状态。

3.2.2、配制系列标准溶液
（1）配制维生素C系列标准溶液：称取0.0132g维生素C，溶于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。

此溶液浓度为7.50×10−5mol/L。

分别吸取上述溶液4.00 mL，6.00 mL，8.00 mL，10.00 mL于4只洁净干燥的50 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。

（2）配制维生素E系列标准溶液：称取维生素E0.0488g，溶于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。

此溶液浓度为1.13×10−4mol/L. 分别吸取上述溶液4.00 mL，6.00 mL，8.00 mL，10.00 mL于4只洁净干燥的50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。

3.2.3、绘制吸收光谱曲线
以无水乙醇为参比，在220～320 nm范围测定维生素C和维生素E的吸收光谱曲线，确定维生素C和维生素E的最大吸收波长λmax Vc 和λmax Ve，分别作为λ1和λ2。

3.2.4、绘制标准曲线
（1）维生素C标准曲线：以无水乙醇为参比，分别在波长λ1和λ2处测定5个维生素C标准溶液的吸光度值。

（2）维生素E标准曲线：以无水乙醇为参比，分别在波长λ1和λ2处测定5个维生素E标准溶液的吸光度值。

3.2.5.、未知液的测定
取未知液5.00 mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀至标线，摇
匀.在波长λ1和λ2处分别测定其吸光度。

结束工作
（1）实验完毕，关闭电源。

取出吸收池，清洗晾干后入盒保存。

（2）清理工作台，罩上仪器防尘罩，填写仪器使用记录。

4、实验数据处理
4.1、λ1、λ2测定
红色曲线——维生素C 光度吸收曲线
黑色曲线——维生素E 光度吸收曲线
由仪器作图分析直接可得λ1=273.1nm ，λ2=291.9nm 。

4.2、Vc 与Ve 在λ1、λ2处的光度吸收图
4.3、Vc 与Ve 的标准曲线图
Vc 在λ1处的线性回归方程为：y=1480x+0.04991， κλ1Vc
=1480.
Vc 在λ2处的线性回归方程为：y=370x+0.03824，κλ2Vc =370. Ve 在λ1处的线性回归方程为：y=575.22124x+0.0556，κλ1Ve
=575.22124.
Ve 在λ2处的线性回归方程为：y=1834.070x+0.04076， κλ2Ve =1834.070. 4.4、Vc 、Ve 的浓度
A λ1A+
B =0。

068 A λ2
A+B =0。

0724 κλ1Vc =1480 κλ2Vc =370 κλ1Ve =575.22124 κλ2Ve
=1834.070 代入下式有
c A =（A λ1A+B
·κλ2B −A λ2A+B ·κλ1B ）/（κλ1A ·κλ2B −κλ2A ·κλ1B
） c A =3.32×10−5mol/L
代入下式有
c B =
（A λ1A+B −κλ1A ·c A ）/κλ1B c B =3.28×10−5mol/L
5、结果分析与讨论 在本实验中，要用石英比色皿而不能用玻璃比色皿，这是因为一般紫外光区用石英比色皿,可见光区用玻璃比色皿。

石英比色皿可用在全波段,玻璃比色皿只能用于340nm 以上波长,因为玻璃不透紫外光。

本实验中所用的参比溶液为乙醇，参比溶液又叫空白溶液，测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液，主要是用作空白调零，即直接从仪器上减去空白试验产生的干扰值。

因此本实验中根据维生素C 、E 的溶解性质，需要用乙醇作为本次实验的参比溶液而不是水。

紫外可见光度法测定参数是吸光度A ，该值与入射光强度和透射光比值有关，入射光增大，透射光也增大，增大检测器的放大倍数，也影响入射光和透射光的检测，而且除待测物之外，其它物质也可能对入射光产生吸收，因此限制了灵敏度。

对于低浓度的待测液该方法的可信度也较低，假如一种待测物质含量很低的样品用紫外可见法分析，如果透过率为T ＝99/100，则吸光度A ＝log100/99＝0.004，这个吸光值很低，几乎与噪声相近，可信度下降，几乎无法确定。