Sephadex G-50 分离范围：1 500-30 000 交联葡聚糖 （Sephadex） 聚丙烯酰胺凝胶 （Bio-Gel P） 琼脂糖凝胶 （Sepharose，Bio-Gel A）
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凝胶过滤原理 根据蛋白质分子大小用凝胶作为介质分 离蛋白质的一种柱层析方法。 比凝胶网孔大的分子被排阻在凝胶颗粒 外，而最先流出柱外；比网孔小的分子 能不同程度的自由出入凝胶颗粒的内外， 洗脱路径长，因而得到分离。
第二节 蛋白质的分离纯化 一、蛋白质分离提纯的一般原则
高纯度、高活性、高回收率
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二、蛋白质的分离方法 （一）根据分子大小不同的分离方法 1.透析（dialysis）和超滤（ultrafiltration） 半透膜 （玻璃纸，火棉纸） 透析常用于蛋白质溶液的除盐 超滤常用于蛋白质溶液的除盐、浓缩
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（二）利用溶解度差别的分离方法 1. 等电点沉淀 2. 蛋白质的盐溶与盐析 3. 有机溶剂分离法 4. 温度对蛋白质溶解度的影响
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（三）根据电荷不同的分离方法 1 电泳（electrophoresis） 在一定的电场和介质中，蛋白质迁移速度 与蛋白质分子量、所带电荷及分子形状有 关。
凝胶孔径（浓缩胶，分离胶）、缓冲液、pH 三种效应：电荷效应、分子筛效应、浓缩效应
c. 毛细管电泳（capillary electrophoresis） 50 m内径
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d. 等电聚焦电泳（IFE）
蛋白质在具有pH梯度的介质中进行分离。 在电场中，每种蛋白质成分将移向并停留 在等于其等电点的pH处，形成一个很窄 的区带。
迁移率＝某一蛋白条带移动距离/前沿到达距离
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a. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
丙烯酰胺 和 交联试剂（甲叉双丙烯酰胺）在过 硫酸铵催化下聚合而成。 可以控制孔径大小
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b. 不连续电泳（discontinuous electrophoresis）
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（四）根据蛋白质的吸附特性分离 填料有： 羟基磷灰石、活性碳、 硅胶、氧化铝等
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（五）利用特异生物学亲和力纯化
利用蛋白质所具有的生物学特异性，通 过与特异配基专一、可逆结合（非共价 结合）分离蛋白质的一种层析方法。 优点：高效、高纯
亲和层析（afinity chromatography）
进行。
蛋白质在电泳胶上的迁移率与蛋白质分
子
、
和
有关。
不连续电泳分离效果好是因为它同时具Leabharlann 有、 、 三个效应。
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DEAE-cellulose 是一种
。
蛋白质混合物经凝胶过滤后，大分子 先于小分子被洗脱。（）
盐析和透析均可用于蛋白质除盐。（）
羧甲基纤维素属于阳离子交换剂。（）
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快速蛋白液相层析 fast protein liguid chromatography(FPLC)
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思考题 蛋白质胶体稳定性的原因 凝胶过滤、离子交换柱层析的原理 电泳原理 亲和层析、盐析
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蛋白质分离可分别根据
其
、
、
、 性质
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2. 密度梯度离心 （density gradient ultracentrifugation） 常见有蔗糖密度梯度（连续、不连续） 质量和密度大的蛋白质分子沉降快
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3.凝胶过滤（gel filtration chromatography） 分子筛层析，分子排阻层析
用途：按等电点分离蛋白质 鉴定蛋白质等电点
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双向电泳
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2. 离子交换柱层析 3. （ion-exchange chromatography）
纤维素离子交换剂 阳离子交换剂: CM-Cellulose(羧甲基纤维素) 阴离子交换剂: DEAE-Cellulose 葡聚糖离子交换剂（Sephadex ion exchanger） 兼分子筛效应