第三节
提取分离方法
聚酰胺： 其洗脱顺序先—后 (1)苷元相同, 三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元 (2)母核上羟基增加，洗脱速度减慢 (3)羟基数目相同,有缔合羟基>无缔合羟基 (4)不同类型黄酮的洗脱顺序：
异黄酮>二氢黄酮（醇）>查耳酮>黄酮>黄酮醇
（芳香核、共轭双键多者吸附力强）
第三节
提取分离方法
分离黄酮苷－－分子筛起主导作用。在洗脱时，
黄酮苷类按分子量由大到小的顺序流出柱体。
第三节
提取分离方法
（二）梯度pH萃取法
应用：分离酸性强弱不同的黄酮苷元 酸性比较：7,4 ’-OH > 7-或4’-OH > 一般OH > 5-OH 溶于 NaHCO3 Na2CO3 不同浓度的NaOH
样 乙醚 乙醚液 依次 品 萃取
应用：可用于各类化合物的鉴别
第二节 理化性质与颜色反应 三、显色反应 （二）络合反应 黄酮类化合物分子结构中多具有下列结构：
O O OH OH O O OH OH
可与金属盐类试剂产生络合反应 （1）锆盐 （4）镁盐
（2）铝盐
（3）铅盐
（5）氯化锶
（6）三氯化铁反应
第二节
理化性质与颜色反应
O O
（1）锆盐
HCl+Mg
＋ － ＋
HCl＋Zn
－
NaBH4
＋ 二氢黄 酮类 －
黄酮 (醇) 异黄酮（少 黄酮醇类 (苷 ) 数显色） 3-O-糖苷 黄烷醇类 二氢黄酮 类（苷） 查耳酮 橙酮
黄酮醇
其它 注：二 黄酮 二氢黄酮 氢黄酮 类化 二氢黄酮 醇-3-O-糖 与磷钼 合物 醇 酸试剂 苷 反应呈 棕褐色
异黄酮：微黄色
花色素可随着pH值的变化颜色有所不同： 红色（pH<7），紫色(pH8.5)，蓝色 (pH>8.5)
第二节
理化性质与颜色反应
• 溶解度 苷元：难溶于水，易溶于乙酸乙酯，乙醚等有 机溶剂中 苷：易溶于水、乙醇、甲醇中，糖链越长水溶 性越大。 黄酮(醇), 查耳酮：平面型分子 二氢黄酮(醇)：非平面型分子 花色素：离子 H
本章内容
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 绪论 理化性质与颜色反应 提取分离方法 结构鉴定 结构研究实例
第四节
结构鉴定
一、色谱法的应用 硅胶TLC 聚酰胺TLC 双向纸色谱法
第四节
结构鉴定
双向纸色谱法 第一向展开：分配作用，醇性溶剂为展开剂。 如：n-BuOH-HAc-H2O上层溶液。 Rf：苷元>单糖苷>双糖苷
第二节
理化性质与颜色反应
二、酸碱性
碱性： 来源：1-位氧原子的未共用电子对，显微弱的碱性， 可与强酸生成（佯）盐而溶于酸水中。
OH HO O OH OH O OH
H+
+ O
OH
第二节
理化性质与颜色反应
三、显色反应
（一）还原反应
HCl-Mg 反应 HCl-Zn 四氢硼钠（NaBH4) 为（+）的反应，颜色多为橙红-紫红
第三节
提取分离方法
药材
甲醇或乙醇提取，回收醇
浸膏
加水溶解
水溶液
分别以不同极性溶剂萃取 （石油醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇）
水层 石油醚层 氯仿层 乙酸乙酯层 正丁醇层 （多糖等） （小极性） （苷元） （大极性苷元 （黄酮苷） 及单糖苷）
第三节
提取分离方法
2.碱提酸沉法 • 原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出。 • 碱：常用Ca(OH)2，或CaO水溶液。 • 优点：可使含酚羟基化合物成盐溶解，另一方面 可使含COOH的果胶、粘液质、蛋白质等杂质形 成沉淀而除去。 • 注意：碱性不宜过强，以免破坏黄酮母核； 酸化时，酸性不宜过强，pH3~4即可，以免 形成（佯）盐而溶解。
答案： 1. 聚酰胺柱色谱洗脱顺序：由先到后 D，E，C，B，A 2. 用硅胶柱色谱洗脱顺序：由先到后
A，B，C，D，E
第三节
提取分离方法
葡聚糖凝胶 常用型号：Sephadex-G，Sephadex-LH20 机理： 分离游离黄酮－－靠吸附作用。吸附程度取决于
游离酚羟基数目，苷元的羟基数越多, 越难洗脱。
第三节 操作
提取分离方法
2.碱提酸沉法
槐花米 （15g）
实 例
加水 300ml
搅拌下加 入石灰乳 调节 PH8-9 直火加热
保持微 沸30min
双层滤纸趁 热抽滤
滤液 残渣
在60-70度下，用 浓盐酸调PH3-4
静置
第三节
提取分离方法
3. 离子交换
原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；采用阴离子
交换树脂交换，加酸后析出，用有机溶剂回流提 取。
各 5%NaHCO3 部 分别 5%Na2CO3 酸化 分 0.2%NaOH 黄 酮 4%NaOH
第三节
提取分离方法
（三）利用分子中的特定基团 醋酸铅沉淀法： 邻二酚羟基黄酮＋醋酸铅 沉淀 不具有邻二酚羟基＋碱式醋酸铅 沉淀 硼酸沉淀法： 邻二酚羟基＋硼酸 它黄酮分离。
络合物溶于水，与其
第三节
提取分离方法
+
O O O
+
O-
O
O-
共性： B环OH增加，峰带I 红移，特别是4‘-OH，红移大； A环OH增加，峰带II 红移。
A环苯甲酰系统峰带II， 220~280nm
B环桂皮酰基系统 峰带I，300~400nm
第四节
结构鉴定
1.黄酮、黄酮醇类
II I
峰带I和II强度相似
nm
带I ：黄酮类
304~350nm
C3与B环相连：异黄酮（Isoflavone）
C环开环：查耳酮（Chalcone） C环还原：黄烷类
A B
O
C 2 3
O
其它类型：花色素类、橙酮类、奥弄类、高异黄酮、 山酮类
第一节 绪论
例
HO O OH OH
OH HO O
OH OH O
OH
O
槲皮素
OH OH H HO O H OH OH
柚皮素
HO O
第三节
提取分离方法 药材甲醇提取物
4.炭粉吸附法
分次加入活性炭，搅拌，静置， 检查上清液有无黄酮反应，过滤
滤液 吸附后活性炭粉 依次用沸水、沸甲醇、7% 酚/水、15%酚/醇洗脱 沸甲醇 7%酚/水 15%酚/醇 浓缩，加乙醚
沸水
乙醚层（酚） 水层（黄酮苷）
第三节
提取分离方法
二、分离
（一）采用各种色谱方法： 硅胶色谱：按极性大小分离，主要分离极性小 和 中等极性的化合物。可用CC，PTLC。 聚酰胺色谱：原理：氢键吸附 葡聚糖凝胶色谱：原理：分子筛结合吸附
O O 黄酮 O OH O 异黄酮类 O OH OH O OH 双氢黄酮醇 O OH 黄酮醇 O OH 奥弄类 O + OH OH 花色素 OH 黄烷醇 OH OH 双氢查耳酮 O O OH OH
O
O
O
第一节 绪论
C3-位：有OH 黄酮醇 (Flavonol)
无OH 黄酮 (Flavone)
C2－3饱和：二氢黄酮（醇）(Flavanone)
第二向展开：吸附作用。水性溶剂为展开剂。
如：2~6%HAc，3%NaCl等。
Rf：(1)苷元在原点附近，糖链越长，Rf越大；
(2)苷元：黄酮(醇)，查耳酮 < 二氢黄酮 (醇)，二氢查耳酮
第四节
结构鉴定
二、紫外光谱法
（一） 黄酮存在桂皮酰基及苯甲酰基组成的交叉共
轭系统，在200~400nm间，有两个主要的紫 外吸收带
习题：下列黄酮化合物， （1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，
（2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱， 分别写出洗脱顺序
HO O OH
OH HO O
OH GlcO O OH
OH O A
OH O B
OH
OH
O
C
O Rha-GlcO O O
OH Rha-GlcO O OH
OH
O
D
OH
O
E
第三节
提取分离方法
OH
O
（ +） （ +） （ -） 黄色，加枸橼酸,褪色 （ +） （+）黄色 （ +）
本章内容
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 绪论 理化性质与颜色反应 提取分离方法 结构鉴定 结构研究实例
第三节
提取分离方法
一、提取精制 根据化合物的性质，可采取以下提取方法 化合物：极性——溶剂萃取 酸性——碱提酸沉 解离性—离子交换 碳粉吸附法 1. 溶剂萃取法
8 7 6 5 9 1 2' 2 3 4 1' 6' 5' 3' 4'
7 8 9 1 2' 2 3 4 1' 6' 3' 4' 5'
O
O
C
A
10
6 5 10
B
O
C6-C3-C6
二、生物合成途径及分类： 桂皮酸－莽草酸途径
第一节 绪论
OH
OH
CoAOOC
莽草酸途径 OH O
糖
查耳酮
O
OH 双氢黄酮
O H O H
水 中 溶 解 度 增 加
第二节
理化性质与颜色反应
二、酸碱性 酸性：来源分子中的酚羟基； 可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺。
酸性强弱的比较：取决于羟基的数目和位置：
7,4′-OH > 7-或4 ′ -OH > 一般OH > 5-OH