(1)再障和非肿瘤性疾病: ①方案一:单一环磷酰胺(CTX)静滴。 ②方案二:环磷酰胺和全身照射 (CTX+TBI）。 (2)白血病: ①方案一CTX+TBI ②方案二:CTX+柔红霉素+TBI
骨髓采集 在手术室内对供者进行骨髓采集。 一般应用硬膜外麻醉,采髓部位以骼 后上棘为最佳,也可在骼前上棘或/和 胸骨或/和棘突部位,儿童则需加胫骨 处,以多点和不同深度采髓,每点采 10～15ml骨骼血,总量10～ 15ml/Kg(600～1000ml)。
2．抗肿瘤化疗药物 （1）最大限度地杀灭患者体内的肿瘤细 胞； （2）在杀伤肿瘤细胞同时，也使正常造 血细胞受到损害，但由于正常造血细胞恢 复时间比肿瘤细胞短，故当骨髓抑制解除 时和正常造血细胞恢复之际，外周血干细 胞数量反馈性增加达25～100倍，从而起 到了造血干细胞动员效果。国内常用药物 有环磷酰胺；阿糖胞苷。
（二）供者选择: 首选HLA配型相合的同胞兄弟姐 妹为供者,如有两个以上供者应选择 与患者ABO血型或性别相同者。 也可选择单倍型相同的家庭成 员作为供者。
选用HLA表型相同或相似的无 关人员作供者,由于HLA的高度多 态性,使其概率甚小。
三、同种异基因骨髓移植(Allo-BMT)和同 种同基因骨髓移植(SBMT) （一）移植步骤: 1.供受者红细胞血型检测及HLA配型, 应用PCR进行HLA-A、B、C、DR抗原分型, 且HLA相同供受者进行混合淋巴细胞培养和 淋巴细胞毒交叉试验。
2．方法： 运用血细胞分离机如Fenwall CS3000，分离3－4次或COBE SPECTRA分离1－2次，直至采集到 造血功能重建所需的细胞数。
四、外周血干细胞净化 净化方法有也是二种：阳性选择和 阴性选择。 五、外周血干细胞体外扩增 为了确保PBSCT后成功的造血重建， CD34＋细胞不应低于2.5×106/kg。因此， 可采用部分CD34＋细胞进行体对扩增。
入层流室当天剪指甲,剃尽全身毛 发,清洁淋浴后用洗必泰液药浴20～30分 钟,着无菌衣、帽、口罩,用无菌单包裹送 入无菌层流室。 入室后保持无菌环境,进无菌饮食,热 量、蛋白质和维生素补充要足够。 工作人员严格进行反向隔离。
4.骨髓移植前预处理 预处理目的是抑制受体免疫系 统,不使移植的供体造血干细胞被 受体所排斥。各疾病预处理的方案 很多。
外周血造血干细胞移植
一、外周血干细移植类型 外周血造血干细胞移植可分为： （1）自体外周血干细胞移植（APBSCT） （2）异基因外周血造血干细胞移植 （Allo-PBSCT)。 供受体选择及移植前准备同骨髓 移植。
二、外周血干细胞的动员与采集 （一）动员 在正常生理条件下，外周血干细胞 数量很少，只有骨髓造血干细胞量的 1～10％，因此，不能满足临床PBSCT 数量的需要。常用动员剂有以下几类： 1．重组人造血生长因子
目前认为第一次PMN峰的出 现是由于外周血中较晚造血祖细 胞增殖分化的结果；第二次峰值 的出现则是由于较原始造血干细 胞增殖分化的结果。而血小板升 至 50.0×109/L平均时间为13天。
2.供者准备: 详细询问供髓者的病史和全面体 检，对血、骨髓及心、肝、肾、免疫 功能等进行检查。骨髓检查包括常规 分类、粒-单集落形成测定(GM-CFU)、 染色体分析,此外还应检查血清巨细胞 病毒等病毒抗体滴度和华康氏反应。
如为同性供者应查红细胞同 工酶和血型(包括亚型),以此作为 移植后骨髓是否植入的依据。 另外，供髓前4周开始采用 自体血保存法储备自体血600～ 800毫升。
当需要应用时，回输前将冻存的外周 血干细胞悬液立即置入40～42℃水浴中 3min内迅速解冻， 然后低温离心去除含DMSO上清液。 加等量RPMI1640保养液稀释，每次输 注400～600ml，在1小时内静脉输完毕。
七、外周血干细胞移植后植活特点 外周血干细胞移植后，其外周血移 植后中性粒细胞（PMN）上升常出现二个 峰值。 第一次峰值即在PMN恢得到 0.5× 109/L，平均出现在移植后11天，随后呈一 度下降趋势，然后约在第3～4周时再次出 现第二峰值，至后白细胞恢得正常。
二、供受者选择: （一）受者(患者)选择应注意: (1)年龄控制2～50周岁。 (2)选择合适的移植时机,如：急淋高危组 和急非淋CR1后,低危组急淋则在CR2后；慢 性粒细胞性白血病在慢性期的早期(发病 一年以内)，而重型再生障碍性贫血应尽 早移植。
(3)无急慢性感染病灶。 (4)左心室射血指数＞5.0、用力肺活量 (forced vital capatity)≥60%、一氧化 碳弥散能力(DLCO)≥50%。 (5)血肌酐＜110μ mol/L(2mg/dl)和总胆 红素＜18μ mol/L(＜2mg/dl）。
造血干细胞移植
造血干细胞移植(SCT)按其干细胞的 来源,分为： （1）自体造血干细胞移植(ASCT) （2）同种异基因造血干细胞移植 (Allo位又可分为： （1）骨髓移植(BMT) （2）外周血造血干细胞移植(PBSCT) （3）脐血造血干细胞移植(NCSCT) （4）胎肝造血干细胞移植(NLSCT)
骨髓液按等量比例与保养液混和， 经不同孔径（0.201～0.307mm）的不 锈钢滤网，滤去骨髓中脂肪颗粒和碎 片。在混有红细胞和骨髓液中每亳升 加入肝素15-20U， 4℃保存36～48小 时后回输。也可应用10％二甲亚砜作 为骨髓冷冻保护剂，使骨髓保存于－ 196℃的液氮中。
（二）骨髓净化 目前国际上将净化方法分为两大 类：即负净化也称阴性选择：将肿瘤 细胞从移植物中清除掉；正净化也称 阳性选择：将正常造血干细胞从移植 物中分离纯化。临床上应用方法多为 负净化。但无论是物理学、生物学或 其他方法都还不够理想。
（3）骨髓回输 ★从受者锁骨下大静脉插管内输入。 ★输入前将装有骨髓血的采血袋或采集 瓶倒置半小时,使骨髓中脂肪浮于上层, 输注即将结束时,弃去浮在上层的脂肪 滴,以防发生脂肪栓塞。 ★输毕后须应用采髓时所用肝素剂量的 同等剂量鱼静蛋白(1mg鱼精蛋白中和 100u肝素)。
（二）Allo-BMT骨髓植活标准 （1）植活的直接证据： ★受者体内出现供者型的性染色体，标记 型染色体， ★HLA（I、II、和III类）抗原，红细胞、 粒细胞和血小板抗原， ★红细胞与白细胞同工酶，同种异型免疫 球蛋白以及其它基因标记等。
3.受者准备 预处理前应仔细体检； 进行痰、尿、粪便、皮肤、耳、鼻、咽拭 子细菌、真菌培养； 预处理前一周开始口服肠道抑菌剂,； 洗必泰液漱口,洗必泰甘油涂鼻、外耳道, 利福平眼药水滴双眼等； 注意肛周清洁卫生。
实验室检查主要包括骨髓、血 及心、肺、肝肾功能等检查。除做与 供者相同的项目外,还应查肺功能、X 线胸片、如有条件者可做有关内分泌 方面的检查。
移植骨髓所需的有核细胞数应按 受（患）者体重和根据供体来源而定： （1）SBMT需3.0-5.0×107/Kg （2）Allo-BMT需》2.0-6.0×108/Kg 当采集到400ml时,应开始回输事 先采集的自身贮备血,以防休克,术后 需补充各种造血因子。
（2）过滤 通过17、18号针头二次过滤,或 不锈钢网(孔径0.201～0.307mm)过滤 后注射至血袋或采集瓶中。一般吸取 的骨髓用生理盐水或1640稀释液肝素 抗凝,每毫升骨髓血需含肝素15～20 单位，以防骨髓血凝集。
采集前动员方案选择要根据恶性肿瘤的 类型和患者的具体情况而定。 白血病或恶性淋巴瘤晚期等血液系恶性 肿瘤作自身的PBSCT时，以选择抗肿瘤化疗 药物作为动员剂量为适宜。 而对于Allo-PBSCT供者宜选用GM－CSF 或G－CSF。
（二）采集 1．采集时机选择： （1）动员化疗结束后2－3周，外周血白细 胞计数升至（1.0-2.0)×109/L时。倘若单 用G-CSF动员宜在白细胞计数升至（5.510.0）×时，血小板计数50×109/L； （2）外周血CD34阳性细胞1％（正常为 0.20.1％）。但采集时机仍需根据患者的 当时情况而定。
⑥自体骨髓成功的关键是： 保存造血干细胞的活力和基本功能。 骨髓采集后如置于常温下,骨髓在培养液 或保存液内最长不能超过72小时。 因此大剂量放、化疗须在短时间内完 成,或者有时难以忍受。 在-196℃长期保存。
⑦对缓解期肿瘤(尤其是血液系统的白血 病和多发性骨髓瘤)进行BMT,采集的骨髓 最好能行体外净化,去除残存的肿瘤细胞, 否则移植后复发率极高。 ⑧移植后不出现GVHD,就不会出现抗肿瘤 效应,故复发率极高。
（2）植活的间接证据：受者发生急、 慢性GVHD。 （3）骨髓重建的证据：移植后2－4 周，受者网织红细胞、粒细胞、淋巴 细胞和血小板迅速增高，并逐渐重建 造血免疫功能。
四、自身骨髓移植 （一）自身骨髓的采集和保存 骨髓的采集在手术室内予以硬膜外麻 醉下进行，儿童则采用全身麻醉。穿刺部 位选择在左、右前后髂上棘和胸骨，儿童 可选择胫骨上端等部位。 ABMT需有核细胞总数5.0～30.0×109 （0.5～5.0×108/kg体重），骨髓粒系祖 细胞（CFU－C）平均1.0～4.0×104/kg体 重。
（三）自身骨髓移植前预处理 ABMT的预处理目的是：①使骨髓 产生一定空间，使造血干细胞有植入 和增殖的场所；②进一步清除体内肿 瘤细胞。 精典的方案CTX加全身照射（TBI） 或分次全身照射（FTBI）进行预处理。 肺需要适当屏蔽。
（四）骨髓回输：同前 （五）自身骨髓移植后造血功能恢 复（植活标志） ABMT后外周血白细胞从无恢复 到1.0×109/L平均需16－21天；血小 板恢复50×109/L平均需14－21天， 粒细胞恢复>0.5×10 9/l，平均21天。
六、外周血干细胞的冻存 通常每次经血细胞分离机分离 后所得的细胞悬液约50ml，可加入 等量20％二甲基亚砜（DMSO）和 RDMI1640保养液，使DMSO的最终浓 度调整至10％。然后分装于血液冻 存袋内（每袋100ml）。
采取二步降温法： 第一步先1℃/min速率降至－45℃， 第二步则以5～10℃/min降至－ 80℃～－90℃，程序结束后，最后将 样品置于－196℃液氮中贮存。