Ang -1、Ang -2和T ie -2表达与肝癌血管生成的关系1 233000 安徽蚌埠医学院附属医院肿瘤外科200240 上海 复旦大学附属肿瘤医院闵行分院肿瘤内科何胜利,高 勇,刘道永1,沈 婕=摘 要> 目的:检测血管生成素1(Ang -1)、血管生成素2(A ng -2)及其共同受体T ie -2在肝癌中的表达及与肝癌血管生成的关系。
方法:采用免疫组化(SP 法)对53例肝癌标本、30例癌旁组织及10例正常肝组织中A ng -1、A ng -2、T ie -2及CD31标记的微血管密度(M VD )进行检测,分析它们与肝癌血管生成的关系。
结果:A ng-2及T ie -2在肝癌组织中的阳性表达率分别为6719%、7515%,明显高于癌旁组织4313%、4213%和正常肝组织2010%、2010%(P <0105);A ng -1在肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中的阳性表达率无显著性差异(P >0105);CD 31标记的M VD 与A ng -2、T ie -2表达密切相关。
CD31标记的MV D 与A ng -2、T i e -2在肝癌组织中表达呈正相关(P <0105)。
结论:A ng-1、A ng -2和T ie -2的表达在调节肝癌的血管生成中可能起重要作用。
=关键词> 血管生成素; T i e -2; 肝癌; 血管生成中图分类号:R 73517 文献标识码:A 文章编号:1009-0460(2009)05-0439-04R elationship of expression of Ang -1,Ang -2and T ie -2and angi o genesis i n hepat oce llular carcino m a H E Sheng-li ,GAO Yong,LI U Dao -yong,S HE N J ie .D epart m ent of Oncolo gy ,the Affiliated C ancer H os p ital M inhang B ranch,Shangha i 200240,Ch ina=Abstract > O bjective :T o investi gate the expressi on of ang iopo i nti n 1(Ang -1)and its an tagonist,ang iopo i nti n 2(Ang -2)andT ie -2recept o r in hepato ce llular carci no m a(HCC)and the re l a tion w it h tu m or ang i ogenes i s .M ethods :The expressi on o f the A ng -1/2and T ie -2prote i ns w as perfor m ed i n ten nor m a l li ver tissues,30per-i cancer tissues tissues and 53HCC spec i m ens .The i m m unoh isto -che m i ca l technique w as app lied t o detect t he express i on o fA ng -1/2and T ie -2pro te i ns .R esu lts :T he po siti ve rates o fA ng -2and T i e -2in HCCS w ere 6719%and 7515%,si gn ifican tly h i gher t han those in no r m al tissues and per-i cancer ti ss ues(P <0105).T he w as a pos-i ti ve correlati on bet w een m i c ro -vessel density(M VD )and T he strong expression of T i e -2and Ang -2(P <0105).Conc l usion :These da -tas show tha tA ng -1/2and T i e -2expression p l ay an i m portan t role i n t he ang i ogenesi s i n HCC .=K eyW ords > Ang i opo i nti n ; T ie -2; H epatoce llular carci no m a(HCC ); A ng i ogenesis血管生成素(Ang i o po ieti n ,A ng)在机体和肿瘤血管生成中发挥着重要的作用。
其中Ang -1、Ang -2两个配体与它们共同的受体T i e -2与血管生成密切有关。
肝癌是典型的富血管性的肿瘤,其生长和转移都依赖血管生成调节因子的调控。
血管生成不仅为肿瘤细胞的生长提供了营养,并为肿瘤的浸润和转移提供了通路。
本研究旨在探讨Ang -1、Ang -2及T i e -2表达和肝癌组织中血管生成关系。
1 资料与方法111 一般资料 选取我院2004~2007年及外院外科手术切除标本共53例,男性40例,女性13例;30例癌旁组织均为肿瘤周围未见肿瘤细胞浸润的组织,男性17例,女性13例;正常肝组织10例,男性8例,女性2例。
每例标本均经常规病理确诊为肝细胞肝癌。
112 方法 所有的标本均经4%的中性甲醛固定,常规脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋,4L m 厚连续切片,分别做HE 和免疫组化染色。
采用链酶亲和素-生物素过氧化物酶(SP)进行免疫组织化学染色。
试剂Ang -1、Ang -2、T ie -2和CD31抗体及免疫组化试剂盒均购于SANTA CRUZ 公司,免疫组化采用SP 法,兔抗人CD31抗体(Santa Cruz 公司产品)。
Ang -1、Ang -2、T ie -2及CD31的工作浓度均为1B 100。
Ang -1、Ang -2和T ie -2表达阳性者在细胞膜和(或)胞质见棕黄色颗粒沉积为准。
染色强度根据显色细胞百分比:显色肿瘤细胞占计数细胞<25%为(-);\25%为(+)。
微血管密度(m icro -vessel density ,MVD )计数方法采用Son ja 等介绍的方法[1],先在低倍(@100)镜下全面观察整个视野,选择CD31染色阳性内皮细胞最多、微血管形成最丰富的区域,然后转至高倍镜下(@400)计数3个视野的微血管数,标准为:任何染色为棕黄色的内皮细胞或内皮细胞簇都记为独立的血管,厚壁血管及直径较大者(>8个红细胞直径)不计数,每张切片上都随机选择10个不同高倍视野,计数MVD,取其平均值。
113 统计学分析 用SPSS 1110统计软件处理,应用V 2检验,两样本间相关性分析用Spear m an 秩相关检验。
P <0105为有统计学意义。
2 结 果211 Ang -1表达 53例肝癌组织中Ang -1,呈阳性表达17例,阳性表达率3211%;30例癌旁组织中,Ang -1呈强阳性表达9例,阳性表达率3010%;10例正常肝组织中,Ang -1呈阳性表达4例,阳性表达率4010%。
Ang -1表达与肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织之间无显著性差异(V 2=317,P >0105)。
见图1。
212 Ang -2表达 53例肝癌组织中Ang -2呈阳性表达36例,阳性表达率6719%;30例癌旁组织中,Ang -2呈阳性表达13例,阳性表达率4313%;10例正常肝组织中,Ang -2呈阳性表达2例,阳性表达率2010%。
Ang -2表达与肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织之间的差异有统计学意义(V 2=9117,P <0105)。
见图2。
213 T ie -2和CD31表达 T ie -2在肝癌组织中阳性率为7515%(40/53),明显高于癌旁组织4213%(13/30)和正常肝组织2010%(2/10),其差异均有统计学意义(P <0105);所有肝癌组织中,微血管计数根据CD31阳性表达血管进行计数,CD31在癌组织表达明显,尤其在肝癌组织的边缘部分呈高表达,在癌旁组织和正常肝组织呈弱阳性表达。
见图3、图4。
214 Ang -2、T i e -2与MVD 的关系 CD31标记的MVD 在36例Ang -2阳性表达肝癌组织中表达为28例,MVD 计数为1126?0119,CD31标记的MVD 在图1 Ang -1在肝癌组织中的阳性表达(SP @200)图2 Ang -2在肝癌组织中的阳性表达(SP @200)图3 T i e -2在肝癌组织中的阳性表达(SP @200)图4 CD31单抗标记的肝癌MVD (SP @400)17例Ang-2阴性表达肝癌组织中表达为8例,MVD 计数为0152?0107,Spear m an秩相关分析结果, Ang-2表达与MVD呈正相关(r=01738,P< 0105);CD31标记的MVD在40例T ie-2阳性表达肝癌组织中表达为31例,MVD计数为1137? 0124,CD31标记的MVD在13例T ie-2阴性表达肝癌组织中阳性表达仅为5例,MVD计数为0164? 0113,Spear m an秩相关分析结果,T ie-2表达与MVD 呈正相关(r=01497,P<0105)。
3讨论肿瘤组织是由肿瘤细胞和血管两部分有机构成,肿瘤细胞可促进血管生成,而血管生成又促进肿瘤发展,并为肿瘤转移提供必须的路径。
Ang在机体和肿瘤血管生成中发挥着重要的作用,目前已发现Ang-1、Ang-2、Ang-3及Ang-4四种配体[2]。
生理条件下,Ang/T ie-2系统这一不同于VEGF的血管调节途径,Ang主要在胚胎发育期表达,对于胚胎的塑型和稳定胚胎的血管生长起到关键的作用。
Ang-1、Ang-2及其共同受体T ie-2在女性怀孕期的胎盘组织中呈高表达,对促进血管生成具有重要作用[3]。
Ang在肿瘤的血管新生中作用明显,尤其是Ang-2的特异表达于肿瘤组织的血管重建区参与肿瘤血管的新生,并影响肿瘤的生长和转移[4]。
在肺癌组织中,Ang-2及T i e-2基因也存在过度表达,表明二者对肺癌肿瘤血管新生也可能起着调节作用[3]。
在本研究中,肝癌组织Ang-2表达明显增强,尤其在进展期富血管的肝癌组织中。