植株全氮、全磷的测定测N仪器操作一、测定方法：1、称样前过100目筛，然后将试管洗净，排号，烘干。

2、称样品0.5000g，并做好记录，称K2SO4 4.5g ,CuSO4*5H2O 0.5g ，或者将两种药品按比例混好过筛后，一次性加入 5 g 混合药品。

不论是先加药品还是称样，都必须在其后将两者摇匀，还要求称好的样全部送至试管底部，加了10 ml 硫酸后继续摇匀，在放到机子上去消煮，否则误差较大。

3、消煮：插上电源后按开关---执行---等40 min后420℃时放样---将水开到最大---打开风机和电动风阀（1 h）。

4、消煮后先放到架子上冷却，再将上面的盖子取下冷却至无白雾。

5、硼酸：1 %：50g溶于5000 ml 水，将配好的35ml甲基红试剂和50ml溴甲酚绿加入5000ml硼酸。

甲基红和溴甲酚绿都是称 1 g溶解到1000ml无水乙醇中。

6、NaOH：一瓶默认500g + 1250ml水。

7、0.1mol/L的标准酸：吸取15ml浓硫酸定容到5000ml,即约为0.0558 mol/L的硫酸，换算为标准酸约为0.1116mol/L 的标准酸。

8、标准酸的标定：取少许无水碳酸钠于烧杯，在180--200℃下烘4—6小时，取出放干燥瓶冷却至室温，然后称取约0.22 g 于250毫升锥形瓶中，加50毫升水溶解，各加1--2滴甲基红和溴甲酚绿指示剂，用配好的标准酸滴定，在出现红色后加热一些、冷却，反复直至红色不退去为止，记录用量V。

滴定做三个重复还有一个空白。

标准酸浓度计算：C=0.22/（0.05299*V）标定好的标准酸浓度约为0.1115---0.1117mol/L的H+浓度，开机后可以按右上方的∟● 键，输入计算好的标准酸浓度即可。

二、仪器操作：1、开机按钮：按回车键等几分钟，机子自检完成---self-fest-按手型设置键----定到Receiver---回车键，等颜色（中间瓶）与硼酸颜色相同时将机子盖打开。

2、按empty uwrette (排气)，再按回车（反复操作几次至排尽气）3、拿出标准酸的管，按filling uwritte(充气)，回车，反复几次放气，充气，将管插入充液。

4、按（§§）蒸馏键，将程序按到KJ-5，results 打到recovery,重量—0.0000g ，将守门拉下即可进行清洗，拿空管进行清洗2次，清洗第二次时不用换管，直接按回车键。

5、空白:将程序按到KJ-1,result---blank, weight ---0.0000 g,拉下守门。

6、测N：程序按到KJ-1，将result—% Nitrotion, weight—输入样品重量，拉下守门。

7、关机：关机前用空管按照清洗程序清洗2遍，机子擦干净，用洗瓶加水至中间的滴定管，淹没最上面的短电极，关机。

本仪器要求测氮时空白小于0.2 ml,一般当天消煮的空白为0.065左右，消煮好隔夜测定的空白为0.1215左右，空白管要求无称药前无灰尘，加硫酸和消煮前都必须摇匀，消煮也要严格控制时间和温度。

还有本机“落下守门”相当于蒸馏开关的作用，守门现在不灵敏，优势落下时不蒸馏，就要再让它感应一下，千万不要拿起守门，否则测定出错，而且已经加了水和碱，再放上测定时机子继续加液，数据偏高且溶液太多蒸馏很危险。

在水压不够或者水龙头开关被关掉时，也会发生不蒸馏现象。

凯氏定氮法原理实验原理：样品用浓硫酸消化，硫酸在高温下分解为SO2、H2O和[O],所形成的[O]具有高度的氧化能力，在高温时能够氧化有机质形成CO2。

糖类等不含氮的有机质被硫酸分解成CO2 和H2O。

蛋白质在硫酸的作用下分解成氨基酸，氨基酸与硫酸作用形成NH3，CO2，SO2和H2O。

氨在酸性下与硫酸结合，形成硫酸铵。

为了加速消化过程的进行，可在硫酸内加入硫酸钾和硫酸铜的混合粉。

消化后的硫酸铵在加入过量的浓NaOH（40%）时，作用生成NH3，将NH3蒸馏出来，收集在一定得硼酸中，然后用标准酸（HCI）滴定，由用去的标准酸可以计算出氮的含量。

仪器设备：研钵，凯氏定氮仪，凯氏烧瓶（50ml），样品粉碎机，消煮炉，分析天平，通风橱，容量瓶（50ml），移液管（25ml，10ml，5ml，1ml），半微量滴定管，粗天平，小漏斗等。

试剂配制方法:1、浓硫酸（比重1.84）2、硫酸钾与硫酸铜合粉的比例10：1 3、0.01的盐酸溶液：先配制约0.1N的盐酸溶液，标定其准确当量浓度，然后吸取10ml于100ml的容量瓶中，加水定容至100ml。

4、1%的硼酸溶液：1g硼酸溶于100ml不含CO2 的蒸馏水当中（煮沸通常用的蒸馏水一直到原体积的1/4-1/5,就可得不含CO2的蒸馏水）。

5、40%的NaOH溶液。

6、混合指示剂：a.甲基红酒精溶液（称取0.1g甲基红于研钵中，先加1ml 95%酒精研磨后，再加74ml 95%j酒精中）。

零用时，将a、b两液按2：1比例混合即成，此指示剂在P H5.5时溶液无色，小于或大于5.5时，溶液则呈紫红色或绿色。

实验结果计算N%=（V1-V2）*N*14*50*100%/W(1-M%)*V公式中：V1————指定样品所用的HCI的毫升数V2——为滴定空白所用的HCI毫升数N-----HCI的当量浓度14----每毫克当量N的重量（mg）W-----试样风干重（mg）50----定容的容量瓶毫升数M%----水分百分率（测定称样的同时称一份测水分）V-----从消化液中取出供蒸馏的溶液毫升数。

H2SO4—H2O2消煮，钼锑抗比色法一、待测液的制备（H2SO4—H2O2消煮法）1 H2SO4—H2O2消煮原理植物样品在浓H2SO4溶液中，经过脱水、碳化、氧化等一系列的作用后，易分解的有机物则分解，然后再加入H2O2，H2O2在热的浓H2SO4溶液中会分解出新生态氧，具有强烈的氧化作用，可继续分解没被H2SO4破坏的有机物，使有机态氮全部转化为无机铵盐。

2 主要仪器：开氏瓶（50ml）或消煮管、150mL三角瓶；万分之一电子天平、电热板或普通电炉等；定氮仪等。

3 操作步骤称取烘干、磨细的植物样品(过0.25 mm筛)0.3000g~0.5000g，置于50mL开氏瓶（或消煮管）中（勿将样品粘附在瓶颈上），先滴入少量水湿润样品，加浓硫酸8mL，摇匀（最好放置过夜），瓶口盖一弯颈小漏斗，在电炉上先缓缓加热，待浓硫酸分解冒大量白烟时再升高温度。

消煮至溶液呈均匀的棕黑色时，取下开氏瓶，稍冷后提起弯颈漏斗，滴加30 %H2O210滴，并不断摇动开氏瓶。

再加热(微沸)约5 min，取下，稍冷后重复滴加30 %H2O2 5~10滴，再消煮。

如此反复进行3~5次，每次添加的H2O2应逐次减少，消煮至溶液呈无色或清亮后，再加热5~10min（以赶尽剩余的H2O2 )，取下开氏瓶冷却，用少量水冲洗漏斗，洗液流入开氏瓶中。

将消煮液无损地洗入100 ml容量瓶中，用水定容，摇匀。

过滤或放置澄清后供氮、磷、钾测定。

4 注意事项：（1）消煮开始时火要小；（2）加H2O2时要等器皿少冷后，提起小漏斗，直接将H2O2滴入溶液中；（3）消煮要彻底。

消煮好的标志是：溶液呈无色或清亮色；（4）消煮液最后要赶尽H2O2。

否则会影响氮、磷的比色测定。

方法是消煮液呈清亮色后再煮5-10分。

也可观察液面的波动，赶尽H2O2后液面比较平静。

二、植株全磷的测定（H2SO4—H2O2消煮，钼锑抗比色法）1、方法原理在酸性条件下，正磷酸能与钼镝抗发生反应，形成蓝色的物质。

溶液蓝色稳定，蓝色的深浅与磷的含量成正相关，所以，可用比色法测定溶液中磷的含量。

2、主要仪器、试剂（1）主要仪器：50mL容量瓶；分光光度比色计等。

（2）试剂：4mol/L氢氧化钠容易热：溶解16g氢氧化钠于100ml水中。

2mol/L（1/2硫酸）溶液，吸取浓硫酸6ml，缓缓加入80ml水中，边加边搅拌，冷却后加水至100ml。

2-6 二硝基酚或者2-4二硝基酚。

称取0.25g 二硝基酚溶于100ml 蒸馏水中。

磷(P)标准溶液。

准确称取45℃烘干4—8 小时的分析纯磷酸二氢钾0.2195 于小烧杯中，以400ml水溶解，将溶液全部洗入1000ml 容量瓶中，加入5ml浓硫酸，再用水定容至刻度，充分摇匀，此溶液即为含50mg/L 的磷基准溶液。

吸取50ml 此溶液稀释至500ml，即为5mg/L 的磷标准溶液(此溶液不能长期保存)。

硫酸钼锑贮存液。

取蒸馏水约400ml，放入1000ml 烧杯中，将烧杯浸在冷水中，然后缓缓注入分析纯浓硫酸153ml,并不断搅拌，冷却至室温。

另称取分析纯钼酸铵10g 溶于约60℃的200ml 蒸馏水中，冷却。

然后将硫酸溶液徐徐倒入钼酸铵溶液中，不断搅拌，再加入100ml0.5%酒石酸锑钾溶液，用蒸馏水稀释至1000ml，摇匀贮于试剂瓶中。

钼锑抗混合色剂。

在100ml 钼锑贮存液中，加入1.5g 左旋(旋光度+21—+22°)抗坏血酸，此试剂有效期24 小时，宜用前配制。

3、测定步骤吸取消煮并已经定容的待测液5.00～10.00 mL（含P 0.05~1.0mg）置于50ml 容量瓶中，加2,6-二硝基酚（或2,4-二硝基酚)指示剂2滴，用6mol·L-1NaOH 调pH 至刚显黄色，加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容至刻度。

在室温高于15℃的条件下放置30 分钟后，在分光光度计上以880nm或者700nm 的波长比色，以空白试验溶液为参比液调零点，读取吸收值，在工作曲线上查出显色液的P—mg/L数。

工作曲线的绘制。

分别吸取5mg/L 标准溶液0，1，2，3，4，5，6ml 于50ml 容量瓶中，加水稀释至约30ml，加入钼锑抗显色剂5ml,摇匀定容。

即得0，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,mg/LP标准系列溶液，与待测溶液同时比色，读取吸收值。

在方格坐标纸上以吸收值为纵坐标，Pmg/L 数为横坐标，绘制成工作曲线。

4、结果计算全P %=显色液mg/L×显色液体积×分取倍数／(W×106)×100式中：显色液Pmg/L—从工作曲线上查得的Pmg/L；显色液体积—本操作中为50ml；分取倍数—消煮溶液定容体积/吸取消煮溶液体积；106—将ug 换算成g ；W—干土样重(g)。

5、注意事项两次平行测定结果允许误差为0.005%。

最后含磷量在20—30ug最好。

控制磷的浓度主要在于称样量或者最后显色时吸取待测液的量；本法用钼锑抗比色法的时候用880nm比700nm更加灵敏。