精密称定胆酸 5 种组分对照品各 10 mg, 分别置
Chin Pharm J , 2000 N ovember , Vol . 35 N o. 11 745
10 ml 量瓶中, 加甲醇配成 1. 0 mg ml- 1 的储备液。 精取各标准储备液 5, 10, 20, 40, 80, 160 l, 混合, 室 温下氮气吹干, 加 400 l 甲醇使溶, 加 10 l 内 标 ( 500 g ml- 1) 混匀, 配成含各组分浓度分别为12. 5, 25, 50, 100, 200 和 400 g ml- 1 的对照品。进样 10 l, 以浓度为横坐标, 样品与内标的峰高比为纵坐标 绘制标准曲线。
药剂
铝碳酸镁咀嚼片体外吸附胆酸的比较研究
叶敏, 梅丹, 李大魁, 朱珠, 傅强 ( 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院药剂科, 北京 100730)
摘要: 目的 比较铝碳酸镁和硫糖铝在不同 pH 值条件下对胆 酸的体 外吸附 程度。方法 利用 胃十二 指肠模 型, 在 胃液中 加 入一定比例胆汁配成 模拟胆汁返流 的胃 液。将模 拟胃 液调节 至 pH3, pH5, pH7, 然 后分别 加入 不同剂 量铝 碳酸 镁和硫 糖铝, 37 水浴孵育 1 h。建立 HPLC 测定胆酸中各成分浓度的方法, 并 计算吸附率。结果 HPLC 方法灵敏度高、特异性强。铝碳酸 镁对总胆酸 及各组分的吸附率均高于硫糖铝。结论 铝 碳酸镁 的层状网 络结构 对胆酸 的吸附 能力较 强, 可 能更适 用于胆 汁 返流型的患者。 关键词: 铝碳酸镁; 硫糖铝; 胆酸; 吸附 中图分类号: R944. 4 文献标识码: A 文章编号: 1001- 2492( 2000) 11- 0745- 03
在 pH3, pH5, pH7 三个条件下, A, B 两制剂在不 同剂量下对总胆酸及胆酸 5 种组分的吸附率曲线见 图 2。通过对两种制剂吸附胆酸能力进行组间配对 t 检验, 结果表明, 制剂 A 与制剂 B 对总胆酸和胆酸 各组分的吸附具极显著差异。 3 结论与讨论
本试验从临床收集胆酸和胃液, 以一定比例混 合, 模拟体内胆汁反流入 胃时与胃液混合 的情况。 通过对铝碳酸镁和硫糖铝吸附胆酸能力进行比较发 现, 在 3 个 pH 值条件下, 无论是对单一胆酸吸附率 还是计算得到的总胆酸吸附率, 制剂 A 都显著优于 制剂 B( P< 0. 05) 。
my of Medical Sciences , Peking Union Medical College , Beij ing 100730, China)
ABSTRACT: OBJECTIVE To evaluate the bile acid binding capacities between aluminum magnesium hydroxycarbonate and sucralfate at different pH in vitro . METHODS An artificial gastrointestinal model was used. Different doses of aluminum magnesium hydroxycarbonate and sucralfate were added to the mixtures of gastric juice and bile juice with pH values of 3, 5 and 7, respectively, and then incubated at 37 bath for 1 h. A HPLC assay was developed for the determination of five components in bile acid and their remain contents after incubation and adsorption. RESULTS The assay developed here was accurate, specific and simple. The adsorption rates of each component were higher for aluminum magnesium hydroxycarbonate than those of sucralfate at all of the pH values studied, so did the total adsorption rates. CONCLU SIONS: It demonstrated that the net like structure gel of aluminum magnesium hydroxycarbonate had considerable advantages in respect of bile acid consuming capacity. It may play a major role in treatment of patients with gastro esophageal reflux disease. KEY WORDS: aluminum magnesium hydroxycarbonate; sucralfate; bile acid; adsorption
在较大的 pH 值范 围内, 二者对胆 酸的吸附与 胆酸各组分的极性有关。对极性弱的胆酸组分吸附 性强。有报告[ 4] , 胆酸分为极性和非极性两种。极 性降低时其溶解胆固醇和破坏脂质的能力增强, 则 毒性和腐蚀性越强。胆酸与药物的结合明显受胆酸 上结合的甾体基团和氨基酸的影响。极性较弱的二 羟胆酸 ( chenodeoxycholate 和 deoxycholate) 比极 性较 强的三羟胆酸吸收更好; 大多数情况下也发现甘氨 酸( glycine) 结合物吸收比极性更强的牛磺胆酸( tau rine) 结合物更好。这与试验结果基本吻合。
研究显示[ 1~ 2] 糜烂性胃炎和消化性溃疡与胆汁 反流及胃液中胆酸浓度有关, 胆汁中的胆酸对胃粘 膜的破坏起重要作 用。有效地 清除反流入胃 的胆 酸, 是减少糜烂性胃炎及消化性溃疡发生的重要环 节。抗酸药不仅要通过中和胃酸发挥作用, 而且还 需吸附有害物质。本实验比较了不同剂量铝碳酸镁 和硫糖铝在不同 pH 值条件下对胆酸的体外吸附程 度, 为临床合理用药提供依据。 1 材料与方法 1. 1 仪器、药品与试剂
制剂 A: 铝碳酸镁咀嚼片( 胃达喜, 德国拜耳药
中国药学杂志 2000 年 11 月第 35 卷第 11 期
厂提供, 规格 1. 0 g, 含铝碳酸镁 0. 5 g, 批号 4937D) ; 制剂 B: 硫 糖铝片( 德 国 Merckle Gmbh 药厂, 规格 1 g, 批号 139377) 。
试验发现, 制剂 A 和 B 的吸附能力与剂量呈正 相关性。对极性弱的胆酸组分, 如 TCDCA, TDCA 和
中国药学杂志 2000 年 11 月第 35 卷第 11 期
图 2 两制剂在不同剂量下对总胆酸及胆酸 5 种组分的吸附率曲线
日本岛津 10A 系列: DGU - 12A 脱气机; LC 10AT 泵; SPD- 10A UV- VIS 检测器; C- R7Ae 色 谱记录仪。Hett ich 微量高速离心机( 德国) ; 卧式振 荡器 ( Bioblock Scientific, 德 国) ; 涡旋 混合 器 VM 2000( 中国台湾) 。
胆酸 5 种组分的高低质控样品绝对回收率, 在 98. 0% ~ 112. 4% 之间, RSD 为 2. 42% ~ 9. 4% ; 以模 拟胃液为本底测定加样回收率, 在 92. 0% ~ 112. 4%
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1. 3 数据处理 计算两制剂对胆酸 5 种组分的吸附率及总胆酸
吸附率。为了消除吸附率数据的偏态影响, 先将吸 附率数据取对数, 再进行组间配对 t 检验, 吸收差异 判定界限为 P < 0. 01。 2结果 2. 1 色谱分离与标准曲线
在本试验的样本预处理和色谱条件下, 胆酸各 组分及内标均能达基线分离, 峰形良好; 各标准峰位 无杂质干扰。保留时间分别为: TCA= 6. 604 min, IS
图 胆汁 浓度的 HPLC 色谱图
A- 胆酸 5 种组分标准图谱; B- 药物吸附胆酸后胆酸 5 种组分色谱图。其中: a- TCA; b- INT; c- GCA; d- TCDCA; e- TCDA; f- GCDCA
之间, RSD 为 1. 62% ~ 7. 51% 。绝对和加样回收率 组间无显著性差异, 说明样本预处理过程对胆酸浓 度测定无干扰, HPLC 方法学精密度和准确性符合测 定要求。 2. 3 样本测定结果
1. 2. 2 样品的测定 从胰腺切除患者的胃引流管 中收集胃液; 利用引流管从肝外胆道闭塞的患者获 得胆汁。将胃液与胆汁混合( 2∀1) , 模拟胆汁反流入 胃与胃液混合的病理环境[ 3] 。
吸附试验: 将模拟胃液分成 3 份, 分别用盐酸或 氢氧化钠调至 pH3, pH5, pH7。各取 2. 5 ml 不同 pH 值的 模 拟 胃液 分 别 加 入 0. 02, 0. 05, 0. 10, 0. 25, 0. 50, 1. 00 g 的制剂 A 或 B 粉末, 混合, 于振荡水浴 中 37 下孵育 1 h, 离心提取上清液, 测定未被吸附 胆酸含量。平行做 3 份。待测样 品预处理: 取 150 l 样品上清液于 1. 5 ml 聚丙烯管中, 加入 300 l 甲 醇, 密塞, 摇匀, 离心, 精取上清液 400 l, 加入 10 l 500 g ml- 1 的内标混匀, 进样量 10 l。 1. 2. 3 回收率试验 取胆酸各对照品储备液配成 150 g ml- 1 和 45 g ml- 1 高低两 种质控样品。取 150 l 模拟胃液, 精密加入高低两剂量的各结合胆 酸对照品, 按样品预处理方法操作, 测定方法的绝对 回收率。