ａｎ ｏｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆ
ａ
ｏｆ ＫＩＲ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＫＩＲ ｉｓｏｆｏｒｍ．
ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ
ｉｎ
６
ｃａｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ
ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ
ｓｉｎｇｌｅ
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ
Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＮＫ—ＣＬＰＤ ｐｕｒｓｕｅｓ ｏｆ ＮＫ－ＣＬＰＤ ｉｓ ｓｔｉｌｌ ｂａｓｅｄ
失。４例患者强表达ＣＤ５６（ＣＤ５６岫），ＭＦＩ
４０５．５
（２２８～７６８），４例患者弱表达ＣＤ５６（ＣＤ５６曲＂），ＭＦＩ
万方数据
旦垒痘：鲞垦蕉垫！鱼生ｉ旦釜堑鲞蔓！塑地塑生丛№ｋ！塑堡壁妞Ｐ！塑：鳖垫！垒！！尘：！！：盟！：！
４２．７（２３．２～７８．２），４例患者不表达ＣＤ５６（ＣＤ５６一）， 中性粒细胞中位数及血红蛋白中位数在ＣＤ５６ａ油及 ＣＤ５６一组较ＣＤ５６埘，组明显减少（表２）。５例患者强
１．３
结肿大，１例外周血ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ阳性，１例 合并纯红细胞再生障碍性贫血，１例合并慢性淋巴细 胞性甲状腺炎；１３例患者中１０例检测了ＲＦ因子， １例阳性；９例检测ＡＮＡ抗体者皆阴性（表１）。所有 患者中位随访４２个月，全部生存。
２．２外周血细胞形态学分析
外周血形态学检查结果，白细胞总数正常或者升 高，淋巴细胞比例均增高，颗粒淋巴细胞占淋巴细胞 ２８％。９０％，成熟红细胞同髓片，血小板成簇可见。
ｏｎｅ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ＣＤ５６ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ５７，３
ｗａｓ
ｃａｓｅ
ａｎｄ
ｐａｔｉｅｎｔ ＷａＳ
ｃａｓｅｓ
ｎｏｔ
ａｖａｉｌａｂｌｅ．Ａｍｏｎｇ １２
ｃａｓｅｓ
ｒｅｃｅｉｖｅｄ
ｄｉｄ ｎｏｔ ｅｘｐｒｅｓｓ ＣＤ５７，ａｎｄ ９ ２ ｃａｓｅｓ ｅｘｈｉｂｉｔｉｎｇ
（８１４７０３２８，８１３７０６５７）；Ｓｉｘ
Ｔａｌｅｎｔ Ｐｅａｋｓ
Ｐｒｏｊｅｃｔ
ｏｆ Ｊｉａｎｇｓｕ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（２０１５一ＷＳＮ一０５０，２０１４－ＷＳＮ－００９）
万方数据
‘２８６‘
自查痘：鲞垦疸垫！！生ｉ旦筮堑鲞箜！塑』！！璺堂堂地！！坐ｉ！鱼！ｉ塑Ｐ！！坐墨丛型！Ｑ！亟！！！：堑：№：ｉ
ＳＴＡＴ３突变检测
２．３流式细胞术检测结果
患者外周血ＮＫ细胞占淋巴细胞比例增高，中位 值６６．１％（３４．７％一９２．９％），所有患者均不表达 ＣＤ３、ＣＤ５，全部表达ＣＤ２、ＣＤ７，其中１例ＣＤ７部分缺
１．３．１外周血基因组ＤＮＡ提取 采集患者外周血４ ＩＩｌｌ，２％ＥＤＴＡ抗凝，一２０℃冷 冻保存。用试剂盒提取基因组ＤＮＡ，具体方法参照说 明书。取适量ＤＮＡ原液用紫外分光光度计进行定量 和纯度检测，其余放一２０℃保存备用。
ｇ。ＰＣＲ反应条件：９５ ｏＣ预变性５ ｍｉｎ后，
９４℃变性３０ Ｓ，５８℃复性３０ Ｓ，７２℃延伸１ ｍｉｎ，共
３５个循环，７２℃后延伸５ ｍｉｎ。ＰＣＲ产物４℃保存，取 ５山ＰＣＲ产物进行１．５％琼脂糖凝胶电泳检测。
１．３．４
ＰＣＲ产物测序分析
ＰＲＩＳＭ
ＰＣＲ产物纯化后，用ＡＢＩ
３７３０ＸＬ自动测
自查瘟：鲞垦壅！Ｑ！垒堡ｉ旦箜箜鲞箜！塑地翌堂堂地！竺垫鱼妞Ｐ！！竺墨塑翌！Ｑ！垒！！生：箜：型竺！
・２８５・
・论著・
慢性ＮＫ细胞淋巴增殖性疾病１ ３例 免疫表型及临床特征分析
刘芸王曼邱志远缪讳孙倩吴雨洁 通信作者：李建勇，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｊｉａｎｙｏｎｇｌｍ＠１ ２６．ｃｏｎ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－９９２１．２０１６．０５．００７
１４４
１．２流式细胞术检测
１．２．１试剂和仪器 抗体标记包括异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）、藻红蛋 白荧光素（ＰＥ）、叶绿素蛋白（ＰｅｒＣＰ）和别藻青蛋白 （ＡＰＣ）四类。四色抗体组合分别为ＣＤ３／ＣＤ４／ＣＤ４５／
ＣＤ８、ＣＤ２／ＣＤ７／ＣＤ４５／ＣＤ５、ＣＤ５７／ＣＤｌａ／ＣＤ４５／ ＣＤｌＯ、ＣＤｌ６／ＣＤ５６／ＣＤ４５／ＣＤ３、ＣＤｌ６／ＣＤｌ５８ａ／ ＣＤ３／ＣＤ５６、ＣＤｌ６／ＣＤｌ５８ｂ／ＣＤ３／ＣＤ５６、ＣＤｌ６／
序仪直接双向测序。用ｃｈｒｏｍａｓ软件与基因组序列进 行比对分析，查找突变位点。
２结果
２．１临床特征
１３例患者中，男性８例，女性５例，男女比例 １．６：１；中位年龄５４岁（５１～８６岁）。白细胞中位数 ７．７４×１０９／Ｌ［（２．６０～２３．３４）×１０９／Ｌ］，中性粒 细胞中位数１．２×１０９／Ｌ［（０．９～７．５９）×１０９／Ｌ］， 其中７例（５４％）患者伴有中性粒细胞减少（＜１．５× １０９／Ｌ），ＮＫ细胞绝对值中位数３．８×１０９／Ｌ［（０．８～ １２．１）×１０９／Ｌ］，血小板中位数１６９×１０９／Ｌ［（６６～ ２８４）×１０９／Ｌ］，血红蛋白中位数１０８ ｇ／Ｌ（４３～ ｇ／Ｌ）。初诊时４例患者伴有Ｂ症状，４例伴有乏 力，其中２例由贫血引起。在１３例患者中，４例淋巴
１．３．２引物的设计与合成 通过美国国家生物信息中心（ＮＣＢＩ）的基因库 检索到ＳＴＡＴ３基因序列，用Ｐｒｅｍｉｅｒ Ｐｒｉｍｅｒ ５软件设 计引物扩增包括编码序列与剪切位点序列。引物由上 海英俊生物技术服务有限公司合成。
１．３．３
慢性ＮＫ细胞淋巴增殖性疾病（ＮＫ．ＣＬＰＤ）是一 种成熟ＮＫ细胞淋巴增殖性疾病，ＮＫ．ＣＬＰＤ临床极为 罕见，多呈惰性病程，常致漏诊或误诊。由于临床表现 及细胞形态与Ｔ．大颗粒淋巴细胞白血病（Ｔ．ＬＧＬＬ） 相似且缺乏克隆性证据，诊断上多依赖临床表现及免 疫表型。本研究通过多参数流式细胞术（ＭＦＣ）检测 １３例ＮＫ．ＣＬＰＤ患者的免疫表型并回顾性分析临床 资料，现报道如下。
【关键词】慢性ＮＫ细胞淋巴增殖性疾病；流式细胞术；免疫表型；临床特征；ＳＴＡＴ３突变
基金项目：国家自然科学基金青年基金（８１４７０３２８、８１３７０６５７）；江苏省“六大人才高峰”计划
（２０１５．ＷＳＮ．０５０、２０１４．ＷＳＮ－００９）
Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒ ｏｆ ＮＫ ｃｅｉｌｓ Ｘｕ形ｅ丘Ｌｉ Ｊｉａｎｙｏｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｉｎｄｏｌｅｎｔ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｏｗｈｏｌｏｇｙ，
ｃｏｕｒｓｅ
ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ
ｔＯ
ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ａｃｃｏｌａｙｓ 【Ｋｅｙ
ｍｏｒｅ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＮＫ—ＣＬＰＤ． Ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ｏｆ ＮＫ ｃｅｌｌｓ； Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；
ｃａｓｅ ｗｅａｋｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ
ｗｉｔｈ ｄｉｍ ＣＤ５６
ＣＤ７．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ４ ａｎｄ ５ ｃａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｂｒｉｇｈｔ ＣＤ５６ ＣＤｌ６ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，４
ａｎｄ
ＣＤｌ６ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，４ ａｎｄ ６
ｃａｓｅｓ
ａｎｄ
ａｎｄ
１
ｃａｓｅｓ
ｗｉｔｈ ｎｅｇａｔｉｖｅ ＣＤ５６ ａｎｄ ＣＤｌ６ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｍｅａｎ ＣＤｌ６ ｏｆ ａｎｏｔｈｅｒ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＫＩＲ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ
Ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ＮＫ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｗａ￥ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ａｌｌ ｔｈｅ
ｏｎｅ
ｐａｔｉｅｎｔｓ ｄｉｄ ｎｏｔ ｅｘｐｒｅｓｓ ＣＤ３ ａｎｄ ＣＤ５，ｂｕｔ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＣＤ２ ａｎｄ ＣＤ７ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ
范磊王莉徐卫
李建勇
２１００２９南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院血液科
【摘要】
目的探索慢性ＮＫ细胞淋巴增殖性疾病（ＮＫ．ＣＬＰＤ）的免疫表型及临床特征。方法回
顾性分析２０１２年２月至２０１５年７月间收治的１３例ＮＫ．ＣＬＰＤ患者的临床资料，流式细胞术分析ＣＤ２、 ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤｌ６、ＣＤ５６、ＣＤ５７及杀伤免疫球蛋白样受体（ＫＩＲ）的表达。结果患者外周血ＮＫ细胞 占淋巴细胞比例增高，中位值６６．１％。所有患者均不表达ＣＤ３、ＣＤ５，表达ＣＤ２、ＣＤ７，其中１例患者ＣＤ７ 部分缺失。ＣＤ５６强表达、弱表达及不表达各有４例；ＣＤｌ６强表达、弱表达及不表达分别有５例、６例、１ 例；１例患者ＣＤ５６、ＣＤｌ６荧光表达强度资料缺失。１２例患者检测了ＣＤ５７，其中３例不表达，９例部分表 达。６例患者检测了ＫＩＲ的表达，其中２例呈现单型表达。结论ＮＫ．ＣＬＰＤ临床多呈惰性过程，诊断仍以 形态学为主，流式细胞术免疫分型技术有可能成为ＮＫ．ＣＬＰＤ诊断的有力补充。
２１００２９，Ｃｈｉｎａ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏ印ｈｄ
Ｎａｎｊｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｌｉ
Ｊｉａｎｙｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｊｉａｎｙｏｎｇｌｍ＠１２６．ｃｏｍ
Ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ］
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ
ｏｆ ＮＫ ｃｅｌｌｓ（ＣＬＰＤ—ＮＫ）．
Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ
ｆｅａｔｕｒｅｓ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｉｎ １３ ｃａｓｅｓ ｏｆ ＮＫ・ＣＬＰＤ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１２ ａｎｄ Ｊｕｌｙ ２０１５．Ｆｌｏｗ ｅｙｔｏｍｅｔｒｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＣＤ２，ＣＤ３，ＣＤ５，ＣＤ７，ＣＤｌ６，ＣＤ５６，ＣＤ５７ ａｎｄ ｋｉｌｌｅｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ