水产品兽药残留检测技术
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主要内容
兽药残留概述 前处理技术 液质分析残留方法的建立步骤 方法验证 能力验证思路和经验
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水产品兽药残留分析概述
兽药残留（animal drug residues）是 指给动物使用药物后蓄积或贮存在 细胞、组织或器官内的药物原形、 代谢产物和药物杂质。
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动物个体代谢差异等。
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水产品兽药残留分析概述
对兽药残留实施监控是一种复杂的系统工程， 包括从药物研制、注册登记、生产、使用及食品和 环境监测等诸多环节。建立残留分析方法和制定最 高残留限量、休药期是最基本的方面。
目前国内颁布的法定检测方法还缺乏系统性和 完善性，其他危害性比较大，特别是出口欧盟产品 必须要检测的品种如抗甲状腺制剂、类固醇类、硝 基咪唑类药物、精神类药物、抗蠕虫药物、环境污 染物等的检测方法尚在研究之中。
准确度，精密度，灵敏度等。
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水产品兽药残留检测样品前处理技术
样品处理方法涉及的因素很多，操作复 杂，方法灵活，直接影响各项分析指标、 成本和效率，一般占70%的分析工作量。
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水产品兽药残留检测样品前处理技术
1、提取溶剂的选择
常用的提取溶剂有乙腈，甲醇，丙酮，这些 溶剂与水，稀酸，稀碱的混合溶剂如乙腈-甲 醇，氯仿-甲醇，乙腈-水，或酸化，碱化等。 乙酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，乙醚和叔丁基 甲醚。叔丁基甲醚可代替卤代溶剂。
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兽药残留检测概述
1.文献检索 文献检索仅能显示最适宜的分析方法可能是什么，提供样品处理， 分离和检测方面粗略信息，进行方法的比较和借鉴，调整具体的 实验条件，改进和建立符合要求的新方法。如针对新对象或采用 新技术，可以从较早的化学合成文献得到待测物的物理性质或分 离方面的原始资料，或从具有相近结构或官能团化合物的方法方 法中获得某些信息和提示。有现成标准方法的采用现成标准方法 （验证）。
2002年农业部再次对已发布的兽药最高残留限 量标准进行了修订并重新发布，此次共规定了134 种兽药的《动物性食品中兽药最高残留限量标准》。
随着兽药科技的发展，新兽药品种还会不断出 现，因此需要不断地制定和修订在水产品的兽药最 高残留限量规定及相应的残留检测方法。
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兽药残留检测概述
兽药残留检测 涉及到稳定性试 验方法，提取方 法，净化方法， 测定方法(分离方 法检测方法)。
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1、提取溶剂的选择
乙腈，甲醇，丙酮与样品容易结合，溶剂化作用和 渗透能力强，粘度小，提取速度快，能使结合态的 药物释放，提取的同时脱蛋白脱脂，PH值可调，待 测物分布均匀。但提取的杂质较多，进一步萃取乳 化严重，效果相似，甲醇提取液的杂质最高。“万 能溶剂”DMSO沸点高极少用。
在酯溶性的残留物中，采用非水溶性极性溶剂，乙 酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，乙醚。
加无水硫酸钠，盐析提高回收率。干样（含水小
10%）加水增强提取。
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水产品兽药残留检测样品前处理技术
2、提取方法
均浆提取法；震荡法；索氏提取法（考虑热 稳定性，适合水分少如饲料样品，水产品组 织要和海砂或无水硫酸钠一起研磨成干粉）； 超声波提取（SAE，空化作用，增加溶解， 时间不能长，发热）；超临界流体萃取 （SFE），强化溶剂萃取（ASE）和微波辅助 萃取（MAE）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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水产品兽药残留检测样品前处理技术 2、提取方法
超临界流体密度与液体相似，但是溶质在其中的扩 散系数比液体中大得多。
极性低的碳氢化合物，醚，酯，环氧化合物，可以 在低压力下提取（7-10MPa）进行萃取，羟基，羧 基难萃取，一个羧基和两个羟基的化合物和三个酚 羟基的苯环衍生物可以被萃取；40 MPa以下，糖和 氨基酸都不能被萃取；分级极性差异和挥发性差异。
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水产品兽药残留检测样品前处理技术
2、提取方法
超临界流体萃取仪— 流体源，加压装置， 控温装置，萃取容器， 节流装置，收集装置。 CO2作为流体操作温 度低，利于热不稳定 的化合物，组分中不 含氧，防止氧化。
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水产品兽药残留检测样品前处理技术
3、净化方法
液-液萃取LLE
LLE利用待测组分与样品杂质在互不相溶的 两相中溶解性差异进行净化。设计的基础为： 极性组分与非极性组分；极性物质再分成酸 性，中性，碱性物质。正己烷（石油醚）-乙 腈；正己烷-甲醇；正己烷-丙酮；异辛烷80%丙酮；氯仿-水；乙酸乙酯-水。
水产品兽药残留分析概述
农业部193号公告兽药禁用清单有21类， 包括硝基呋喃类，孔雀石绿类，氯霉素类， 汞制品类等，出口水产品重点监测的兽药 还包扣磺胺类，喹诺酮类，大环内酯类， 青霉素类，四环素类等。出口指定的兽药 检测项目要求不得检出。
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水产品兽药残留分析概述
兽药残留超标的主要原因 1、非法使用违禁药品 2、不遵守休药期，《中国兽药典》。 3、其他原因如饲料加工的交叉污染，
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兽药残留检测概述
3.建立样品处理方法
提取，净化，衍生
4.标准曲线
LC-MS/MS要求设4个点，相关系数大于0.995，有外标 （基质匹配法）和内标，标准加入法，基质匹配法。
5.稳定性试验
一般包括标准溶液（溶剂）和样品中贮存条件下的稳 定性试验，如室温，冷冻，反复冷冻-解冻条件下的稳 定性。
6.方法评价
2.建立测定方法 建立测定方法和线性范围，为后续的各种工作提供分析手段，最 后根据干扰和使用情况逐步确立测定条件和建立标准曲线。如兽 残及代谢物属中等极性或较高极性化合物，不能直接进行GC分析， HPLC常用的检测器有紫外（UVD），荧光（FLD，共轭双烯）, 电化学（EehlD）。MS为非常规检测器。
影响因素：溶剂，PH值（磺胺，喹诺酮，苯 并米唑类，苯乙胺类等）
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水产品兽药残留检测样品前处理技术
3、净化方法
液-液萃取操作方法
分液漏斗震荡，漩涡萃取，逆流萃取，特殊容器萃 取。 从水相中提取药物时溶剂中常带如少量的水分，可 干扰固相萃取，延长浓缩时间和增加杂质，加无水 硫酸钠脱水。高极性的药物在净化中发生吸附，硅 烷化玻璃器皿（1%三甲基氯硅烷的甲苯溶液淌一 次，100℃下干燥30min）；加异丙醇或二乙胺也能 降低吸附。