高中生物选修三现代生物技术导学案专题1 基因工程1．1 DNA 重组技术的基本工具一、学习目标 1、简述DNA 重组技术所需三种基本工具的作用 2、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新二、重点和难点 DNA 重组技术所需的三种基本工具的作用；基因工程载体需要具备的条件课前预习案三、教材重温及自测 1、基因工程的原理：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 和 ，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

由于基因工程是在 水平上进行设计和施工的，因此又叫做 。

2、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” （1）切割DNA 的工具是 ，又称 。

（2）这类酶在生物体内能将外来的DNA 切断，即能够限制异源DNA 的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA 却无损害作用，这样可以保持细胞原有的遗传信息。

（3）由于这种切割作用是在DNA 分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶（简称限制酶）。

（4）DNA 分子经限制酶切割产生的DNA 片段，末端通常有两种形式，即 和 。

例1、下列关于限制酶的说法正确的是（ ）A 、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少B 、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列C 、不同的限制酶切割DNA 后都会形成黏性末端D 、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 3、DNA 连接酶——“分子缝合针”根据DNA 连接酶的来源不同，可以将它分为两类：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为coli E ⋅DNA 连接酶。

coli E ⋅DNA 连接酶只能将 连接起来，不能将双链DNA 片段平末端之间进行另一类是从 分离出来的，称为T 4DNA 连接酶。

T 4DNA 连接酶既可以“缝合”双链DNA 片段互补的 ，又可以“缝合”双链DNA 片段的 ，但连接 之间的效率比较低。

例2、下图为DNA 分子的切割和连接过程。

(1)EcoRI是一种酶，其识别序列是，切割位点是与之间的键。

切割结果产生的DNA片段末端形式为。

(2)不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是连接酶，此酶的作用是在与之间形成键，而起“缝合”作用的。

还有一种连接平末端的连接酶是。

4、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”（1）基因操作过程中使用载体两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。

（2）现在通常使用的载体是，它是一种相对分子质量较小、独立于拟核DNA之外的环状DNA，有的细菌中有一个，有的细菌中有多个。

（3）质粒通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以复制，也可整合细菌拟核DNA中，随着拟核DNA的复制而复制。

（4）其他载体还有和等。

（5）作为载体必须具备以下条件：能够在宿主细胞中复制并稳定地保存，至少具有一个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因，便于进行筛选，如对抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。

例3、以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，分析回答问题。

(1)其中①和是由一种限制酶切割形成的末端，两者要重组成一个DNA分子，所用DNA连接酶通常是。

(2) 和是由另一种限制酶切割形成的末端，两者要形成重组DNA片段，所用DNA连接酶通常是。

四、课堂巩固（一）选择题1、关于限制酶的说法中，正确的是（）A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNAD．限制酶只存在于原核生物中2、DNA连接酶催化的反应是( )A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键B．黏性末端碱基之间形成氢键C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接D．A、B、C都不正确3、作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是( )A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选4、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是()①能自主复制②不能自主复制③结构很小④是蛋白质⑤是环状RNA⑥是环状DNA ⑦能“友好”地“借居”A、①③⑤⑦B、②④⑥C．①③⑥⑦D．②③⑥⑦5、在受体细胞中能检测出目的基因是因为( )A、目的基因上有标记B、质粒具有某些标记基因C、重组质粒能够复制D．以上都不正确6、关于质粒的叙述正确的是( )A、质粒是能够自我复制的环状DNA分子B、质粒是唯一的载体C、重组质粒是目的基因D、质粒可在宿主外单独复制7、基因工程中可用作载体的是( )①质粒②噬菌体③病毒④动物细胞核A、①②③B、①②④C．②③④D、①③④8、下列关于基因工程中所选用的质粒的说法，错误的是( )A、不能没有标记基因B、是小型链状的DNA分子C、能够自我复制D．可与目的基因重组9、下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是( )A、①②B、①③C、①④D．②③10、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是( )(1)限制酶(2)连接酶(3)解旋酶(4)还原酶A、(1)(2)(3)B、(1)(2)(4)C、(1)(2)D、(1)(3)（二）填空题：11、把目的基因与质粒DNA缝合时，中间的碱基对靠连接起来，而两链上的磷酸、脱氧核糖则在的作用下连接起来。

质粒是基因操作中经常用的。

12、基因工程又叫做技术或技术。

这种技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工和，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。

13、治疗糖尿病用的胰岛素，在过去主要是从动物(如猪、牛)体获得的。

自20世纪70年代基因工程发展起来以后，人们开始采用高新技术生产胰岛素，其操作过程如图1—5所示：(1)图中的质粒存在于细菌细胞中，从其分子结构看，可确定它是一种。

(2)请根据碱基互补配对的原则判断，在连接酶的作用下，甲与乙能否拼接起来，并说明理由。

(3)细菌丙进行分裂后，其中被拼接的质粒也由一个变成两个，两个变成四个……质粒的这种增加方式在遗传学上称为。

目的基因通过表达后，能使细菌产生胰岛素，这是因为基因具有控制合成的功能。

高三生物选修3导学案（二）专题1 基因工程1．2 基因工程的基本操作程序[教学目标]1、简述基因工程原理及基本操作程序。

2、尝试设计某一转基因生物的研制过程。

[教学重点和难点]1、教学重点基因工程基本操作程序的四个步骤。

2、教学难点（1）从基因文库中获取目的基因。

（2）利用PCR技术扩增目的基因。

[教学过程]一、目的基因的获取：1．目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的。

2．获取目的基因的方法(1)从基因文库中获取目的基因①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多，导人受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。

基因组文库：含有一种生物的基因②种类cDNA文库：含有一种生物的基因③目的基因的获取根据基因的有关信息：基因的序列、基因在上的位置、基因的产物mRNA、基因的产物蛋白质等特性获取目的基因。

(2)利用PCR技术扩增目的基因。

①PCR：是一项在生物体外特定DNA片段的核酸合成技术。

②条件：已知目的基因的序列。

③过程：目的基因DNA受热形成，与结合，然后在______的作用下进行延伸形成DNA。

④方式：指数扩增=2n(n为扩增循环的次数)(3)人工合成法：基因较小，核苷酸序列已知，可以人工合成。

例1 下列获取目的基因的方法中需要模板链的是( )①从基因文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③反转录法④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成A．①②③④B．①②③C．②③④D．②③二、基因表达载体的构建1．表达载体的组成：目的基因++ +标记基因等。

2．启动子：位于基因的，它是结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。

3．终止子：位于基因的，终止。

4．表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且给下一代；使目的基因____ 和发挥作用。

5．标记基因：受体细胞是否含有目的基因。

6．不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。

例2科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。

起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。

然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导人棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。

科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。

由以上过程推知，作为目的基因的运载体应具备的结构是( )A．目的基因、启动子B．目的基因、终止子C．目的基因、启动子、终止子D．目的基因、启动子、终止子、标记基因三、将目的基因导入受体细胞(一)转化：目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和的过程。

(二)方法1．将目的基因导入植物细胞(1)农杆菌转化法①农杆菌特点：易感染植物和裸子植物，对___________植物没有感染力；Ti质粒的可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。

②转化：目的基因插人−−→−进入农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。

(2)基因枪法基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。

(3)花粉管通道法花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法。

（我的的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的）2．将目的基因导入动物细胞 (1)方法： 注射技术。

(2)操作程序：目的基因表达载体 →取卵(受精卵) →显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到____性动物的 _________________________内发育→新性状动物。

3．将目的基因导人微生物细胞(1)原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。

(2)转化： 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→_________ 细胞吸收DNA 分子。

例3采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是( )①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA 序列，注射到棉受精卵中③将编码毒素蛋白的DNA 序列，与质粒重组，导人细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养④将编码毒素蛋白的DNA 序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵 A 、①② B 、②③ C 、③④ D 、①④四、目的基因的检测与鉴定 1．检测(1)方法：标记了的 、抗原抗体杂交。