自身抗体的检测方法
ELISA法与IIF法比较，有操作 简便，结果判断较客观，无需荧光 显微镜等优点，现在一些医院用 ELISA法来作检测ANA的筛选方法。
自身抗体的检测方法
颗粒凝集法(PA） [原理]：以检测抗脱氧核糖核蛋白体（抗 DNP抗体）为例。从小牛胸腺中提取脱 氧核糖核蛋白(DNP）抗原，致敏聚苯乙 烯乳胶，制成抗DNP抗体乳胶凝集试剂， 当血清中存在抗DNP抗体时，便与乳胶 颗粒上的DNP抗原结合，使乳胶颗粒相 互凝集出现肉眼可见的凝集颗粒。
自身抗体的检测方法
免疫印迹法(IB）：
自身免疫病常规实验室检查
• 血常规： • RA：80%贫血，活动期PLT升高。 SLE：WBC，PLT，Hb均可能降底。 免疫血管炎：WBC增高。 对药物引起的骨髓抑制的监测。
自身免疫病常规实验室检查
尿常规：
SLE：尿蛋白及RBC的出现表明肾脏损伤。
自身免疫病常规实验室检查
• 自身抗体：是指抗自身细胞内，细胞表 面和细胞外抗原的免疫球蛋白。
自身抗体的检测
• 自身抗体是自身免疫病的重要标记， • 每种自身免疫病都伴有特征性的自身抗体， • 某些自身抗体因对疾病的诊断具有高度的特异性， 已成为诊断某些疾病的血清标记性抗体或特异性 抗体， • 某些自身抗体与疾病的活动性有相关性，个别的 自身抗体被证实参与了组织的免疫病理损伤。
系统性红斑狼疮 干燥综合征 类风湿关节炎 硬皮病 多发性肌炎/皮肌 混合性结缔组织 系统性血管炎 抗磷脂综合征 药物性狼疮
自身免疫性溶血性贫血 交感性眼炎 特发性血小板减少性紫癜 晶ຫໍສະໝຸດ 体源性葡萄膜炎 特发性粒细胞减少症
自身免疫性疾病有一百多种，发病率占世界人口的10% 自身免疫性疾病几乎遍布临床各科（非手术科） 疑难 病症？
肝功能：如有异常，应鉴别是何种性质
（自身免疫肝病？） 病原感染常规检查 肝炎病毒：HAV、HBV、HCV、HDV、 HEV、HGV…… EBV,TB……
自身免疫病常规实验室检查
肾功能：免疫肾病（SLE？血管炎？） 肌酶：多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM） 尿酸：痛风？
自身免疫病常规实验室检查
免疫血清学检查
抗心磷脂抗体（ACL）
类风湿性关节炎（RA）的早期诊断
类风湿因子（Rheumatoid Factor RF）是 IgGFc端的自身抗体，因为它是抗体（即 IgG）的对应抗体，故也称为抗抗体。 RF可以是IgG、IgA、IgM型，现在一般 说的RF是指IgM类风湿因子。
类风湿性关节炎（RA）的早期诊断
抗心磷脂抗体（ACL）
• 抗心磷脂抗体（Anti-Cardiolipin Antibodies ACL）是抗磷脂抗体中的一 个重要组成部分，可在多种结缔组织病 中出现，抗心磷脂抗体可分为IgA、 IgM、 IgG。
抗心磷脂抗体（ACL）
• 研究表明ACL在SLE中阳性率为30%， 其次在RA中阳性率为23%，都以IgG型 为主。在SLE病人当中ACL阳性者狼疮 脑病的发病率明显高于ACL阴性患者， 另外，血小板减少，血管栓塞和习惯性 流产也与ACL抗体密切相关。
自身免疫病的基本特征
遗传因素： 强直性脊柱炎（AS）患者90% 为HLA--B27阳性，然而在HLA-B27阳性的人群中发生强直性脊柱炎 的可能仅为2%，而第一级HLA-B27阳性的亲属中，发生强直性脊柱 炎的危险性达20%。
自身免疫病的基本特征 系统性红斑狼疮（SLE）的家族发病率 也较高，在SLE第一代亲属中发病率达 3%--5%，同胞姐妹发病率更高，特别是 单卵双胎更为常见 。在1980年的调查中 35组单卵双胎的患者中，有22组患SLE， 共患病率达62.9%，而双卵双胎8组中仅1 组患病，为12.5%。
常见的自身免疫性疾病图片资料
• 系统性红斑狼疮（SLE）
常见的自身免疫性疾病图片资料
• 类风湿性关节炎（RA）
常见的自身免疫性疾病图片资料
• 系统性硬化症（PSS）
常见的自身免疫性疾病图片资料
• 干燥综合症（SS）
常见的自身免疫性疾病图片资料
• 皮肌炎/多发性肌炎（DM/PM）
自身抗体的检测
抗核抗体谱(ANAS）的检测
抗核抗体(ANA）是自身抗体中 的一组抗体。ANA的研究，从发现 狼疮(LE）细胞算起，迄今40多年来， 人们对ANA的认识不断加深，已衍 生出具有不同临床意义的二十余种 ANA，形成了抗核抗体谱(ANAS）。
抗核抗体谱(ANAS）的检测
抗核抗体：
传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗 原成分的自身抗体的总称。 现代定义：是指抗细胞内所有抗原成 分的自身抗体的总称。
免疫球蛋白、血清蛋白电泳（高球蛋的血 症）。 ESR、CRP（急性期蛋白）：对病情活动 性的判断。 CH50、C3、C4：SLE活动期均降底。 ASO：链球菌感染，风湿热。
自身免疫病常规实验室检查
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抗核抗体谱（ANAs） 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAs） 类风湿关节炎相关抗体 自身免疫性肝病相关抗体 抗磷脂抗体 其它……
IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型 细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期 均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型 核膜型 线粒体型 波形蛋白型 纺锤体型 斑点型 高尔基体 中间体型 核仁型 溶酶体型 着丝点 颗粒型（粗、细） PCNA型 核（多、少）点型
抗核抗体谱(ANAS）的检测
在实际工作中，不管用何种方 法来检测ANA，实际上都是指总抗 核抗体检测。若检测结果为阳性， 则需进行分型。
自身免疫病与自身抗体的检测
与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 免疫 机体识别和排除抗原性异物的功能， 也就是机体免疫系统对抗原刺激所产生 的以排除抗原为目的的生理过程。
体液免疫--- 产生抗体
细胞免疫---致敏淋巴细胞
与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 隐蔽抗原：机体有些组织成分由于解剖 位置的特殊性，正常情况下终生不与免 疫系统接触，称为隐蔽抗原。 眼晶状体、葡萄膜---交感性眼炎； 精子—男性不育。
自身抗体的检测方法
• 核均质型：ds-DNA或抗组蛋白？
自身抗体的检测方法
• 斑点型（S）：抗SSA、抗SSB？
自身抗体的检测方法
• 着丝点型（ACA）：抗着丝点抗体。
自身抗体的检测方法
• 抗纺锤体抗体
自身抗体的检测方法
ELISA法检测ANA [原理]：利用ELISA法，搜集细胞核 和细胞浆抗原，如ds-DNA、 Histones、Sm、RNP、SSA、SSB、 Scl-70、centromere、Jo-1等混合液 包被微孔板，检测抗核抗体。
自身抗体的检测
自身抗体检测的临床意义 • 有助于自身免疫病的早期诊断； • 有助于判断疾病的活动性和预后， 观察治疗反应，指导临床用药； • 有助于进一步研究和阐明自身免疫 性疾病的发病机制。
自身抗体的检测方法
• 间接荧光染色技术（IIF）实验原理
• 细胞、组织切片或纯化的、生化性质明确的物质 均可作为检测自身抗体或病原体抗体的抗原基质。 • 如标本为阳性，已稀释血清中的特异性抗体将与 包被在固相上的抗原结合。 • 第二步，已结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体 结合，然后在荧光显微镜下观察结果。
自身免疫性疾病发生的原因
机体抗原特异性淋巴细胞发生异常，对正 常组织发生免疫应答状态； 机体自身组织成分发生改变从而引起的免 疫应答状态。
自身免疫病的基本特征
• 多数自身免疫病的病因不清，有些 自身免疫病的发生和复发似乎与某 些外因有关，但大多数自身免疫病 是“自发”地发生的，目前未找到 肯定的外因。
抗核抗体谱(ANAS）的检测
抗核抗体(ANA)的阳性率
SLE PSS MCTD SS PM/DM RA 自身免疫性肝炎 正常人 >95% 70-80% >95% 60-70% 50-60% 20-30% 80-90% 5-20%
IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型 细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期 均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型 核膜型 线粒体型 波形蛋白型 纺锤体型 斑点型 高尔基体 中间体型 核仁型 溶酶体型 着丝点 颗粒型（粗、细） PCNA型 核（多、少）点型
与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 自身免疫：是指机体免疫系统对自身抗 原发生免疫应答，产生自身抗体和（或） 致敏淋巴细胞的现象。
与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 自身免疫病： 是指在各种内外因素的作用下， 自身免疫反应过强，超过了生理性自 身免疫反应的强度且持续相当长时间， 造成对正常细胞、器官的功能与结构 的破坏，呈现与此损伤相关的临床表 现及免疫学异常。
自身免疫病的基本特征
• 血液中可检出高滴度的自身抗体和 （或）与自身组织成分起反应的致 敏淋巴细胞。
自身免疫病的基本特征
• 组织器官损伤和功能障碍的范围取决于 自身抗原分布: 器官特异性自身免疫病：桥本氏甲状腺炎， 非器官特异性自身免疫病：如系统性红斑 狼疮（SLE）。
自身免疫病的基本特征
• 自身免疫病的发生与多因素相关， 包括遗传因素、性别差异、年龄大 小、气候环境及地理位置等。
抗核抗体谱(ANAS）的检测
ANA检测—IIF法(金标准) 1、90%以上实验室使用Hep-2细胞为底物; 2、为人来源培养细胞（人喉癌细胞），据有 核大、细胞结构清晰特点； 3、便于结构观察及荧光染色核型分析； 4、 核抗原丰富、特异性强、有完整的ANA抗 原谱(细胞核、浆、骨架、周期）； 5、可预测分析ANA靶抗原范围； 6、 经验性强。
• RF出现于的RA病人血清中，约30%的 SLE、约50%的SS，部分MCTD和少数 PSS病人也可呈阳性，在某些病毒、原虫、 细菌感染和肿瘤等非自身免疫病患者也 可以出现。
类风湿性关节炎（RA）的早期诊断
• RA是一种最常见的自身免疫性疾病，在全 世界大约有1%的人患有此病。是以关节滑 膜炎症的慢性自身免疫性疾病，其预后变 异大，轻者发生轻度关节畸形，重者则发 生严重致死性病变。RA诊断和治疗晚，则 疗效不满意。早期诊断和治疗，炎症有可 能发生可逆性改变，这就显得RA的早期诊 断极为重要。