甲基化影响同裂酶是否切割 Msp I Hpa Ⅱ 为同裂酶 当识别序列CC＊GG的第二个C甲基化后 Hpa Ⅱ
就不能切割了
基因工程第二章
D 同尾酶
同尾酶（isocaudamer）来源各异，识别 的靶子序列也各不相同，但都产生出相 同的粘性末端。
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BamHⅠ
G↓ GATC,
BclⅠ
T ↓ GATC，
Bgl I(GCCNNNN ↓ NGGC) 、 Nde I (C ↓ TNAG) 、 Sfi I (GGCCNNNNN ↓ NGGCC) Xmn I (GAANN ↓ NNTTC) 等。
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有极少数 Ⅱ 型限制性核酸内切酶的切割位点远 离识别序列 , 如 Mbo Ⅱ 识别 GAAGA 序列 , 切 割位点则是 :
第二章 工具酶
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第一节 限制性内切酶
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基因的重组与分离，涉及到一系 列相互关连的酶催化反应,特别是核酸 内切限制酶(restrictionendonucleases) 和DNA连接酶(1igase)的发现与应用， 才真正使DNA分子的体外切割与连接 成为可能。
基因工程第二章
基因工程第二章
B 从5’-3’链上对称轴左方切开和3’-5’链 上对称轴右 方切开形成具有凸出的5’磷 酸基团的粘性末端
基因工程第二章
C 从5’-3’链上对称轴右方切开和3’-5’ 链上对称轴 左方切开形成具有凸出的3’ 羟基基团的粘性末端
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有些限制性核酸内切酶的识别序列为间断型回文 结构 , 酶的切点定位于核昔酸 N 中 ,
的前两个字母 ( 小写 ), 组成酶的 ②菌株 第一个字母加在基本名称之后 ; 大写字母表示
酶的编码基因为染色体外遗传成分。 ③发现次序 罗马数字表示 ④系统名称 RE为R, 甲基化酶为 M ,通常省略
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例如 R-HindIII表示限制性核酸内切酶 , 相 应的甲基化酶用 M- HindIII 表示。 但在
一、寄主限制与修饰体系（R/M体系）
20世纪60年 W.Arber、H.Smith 和D.Nathans 等首 先发现,为此获得了197)10- 4 E.coli K
1
1 E.coli B
(限制)10- 4
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λ(K)修饰
R/M定义：
R/M中的限制作用（restriction)是指一定类 型的细菌可以通过限制酶的作用，破坏入 侵的噬菌体DNA（外源DNA）导致噬菌体 寄主幅度受到限制的现象
EcoRⅠ切割位点
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分类
酶分子的结构 与功能 限制与修饰的 新闻系 限制与修饰的 辅助因子
识别序列
Ⅰ
三亚基多功能 酶
酶蛋白同时具 有甲基化作用
ATP Mg2+ SAM(S-腺苷蛋 氨酸）
特异性，非对 称序列
Ⅱ 单一功能酶
酶蛋白不具有 甲基化作用
Mg2+
特异性，旋转 对称序列
Ⅲ
二亚基双功能 酶
实际应用中 , 尤其是在上下文已交代得很 清楚时 , 限制性内切酶的系统名称 R 常 被省略。
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HindIII
H = genus Haemophilus in = species influenzae d = strain Rd III = third endonuclease
isolated
BglⅡ
A↓GATC,
Sau3AⅠ
↓ GATC
XhoⅡ
R↓ GATC
就是一组同尾酶
由同尾酶所产生的DNA片段可通过粘性末 端之间的互补作用而连接。在基因克隆中很有 用。
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3. Ⅱ类限制性内切酶的切割方式及意义 （1）三种切割方式
A 从识别序列中间切开产生平末端 （blunt end)
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2.识别序列
A 一般识别序列为4-8bp，大部分为双重旋转对称 的回纹结构，即一条5’- 3’与另一条为3’- 5’ 的碱基相同
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B 在某些5或6bp的识别序列中，存在内部简并 或外部简并。 EcoR Ⅱ 可切割 CAGG CCGG 内部简并 CTGG XhoⅡ 可切割 R GATCY 外部简并 Y ： T或 C R ：A或G
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寄主的限制与修饰有两个方面的作用
1、保护自身的DNA不受限制， 2、破坏外源DNA使之迅速降解。
细菌正是利用限制与修饰系统来区分自 身 DNA 与外源 DNA 的。
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二、限制性内切酶(RE)
限制性内切酶是一类 能够识别双链DNA分 子中的某种核苷酸序 列，并由此切割DNA 双链结构的核酸内切 酶。
酶蛋白同时具 有甲基化作用
ATP Mg2+ SAM(S-腺苷蛋 氨酸）
特异性，非对 称序列
切割位点 切割方式
特异性位点5’ 在识别序列内 端至少1000bp 部或附近
随机切割
特异切割
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距特异性位点3’ 端24-26bp处
特异切割
1、 Ⅱ类RE
（1）.命名 主要内容是: ①基本名称 有机体属名的第一个字母 ( 大写 ) 和种名
简并不影响内切酶和甲基化酶的活性，增加了 目标序列的频率
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C 同裂酶isoschizomers) 指来自不同有机体，识别切割相同序列 的一组酶
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切割位置相同 Hind III 和 Hsa I 均 A AGCTT
切割位置不同 Xma I C CCGGG Sma I CCC GGG
5'-GAAGANNNNNNNN ↓ N-3' 3' -CTTCT cmNNNNNN ↓N -5' 这种切割位
点大都出现于非回文型序列的酶之中。
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一些RE及其切割序列
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粘性末端意义： A 用相同内切酶切割后的片段能在5’端靠 碱基配对将单链重叠成双链。促使不同的DNA 分子相连，或使一个DNA片段首尾相连而自身 环化。
R/M中的修饰作用(modification)是指寄主本 身的DNA由于合成后通过甲基化作用得以 甲基化，使DNA获得修饰，从而避免遭自 身限制酶的破坏
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限制与修饰与三个连锁基因有关 hsd R编码限制性核酸内切酶 hsd M编码产物是DNA甲基化酶 hsd S表达产物的功能则是协助上述两种酶 识别特殊的作用位点。