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染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
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耳缘孔口法：
在耳缘先用针穿孔和用剪刀剪口，再用酒精墨 汁涂抹，使黑色渗入孔口，伤口愈合后不易脱 落，这种标号亦可标号１～９９。
适用于大、小鼠。
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• 初步了解动物致死的原因，为研究毒作用的机
制提供线索，进而为制定中毒急救治疗措施提
供依据。
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由急性毒性试验可得到两类毒性参数
上限参数 是以死亡为终点的毒性，包 括绝对致死量、半数致死量、最小致 死量、最大耐受量等；
下限参数 是以非致死性急性毒作用 为终点的毒性，包括急性阈剂量和无 作用剂量等。
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实验动物的年龄与体重的关系
动物
大鼠 小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4
体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg
寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12
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急性毒性试验的动物体重
四 3 11 16 17 20
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随机区组设计
将动物称重，按体重顺序依次排列编号，分成若 干个区组，每一区组的动物体重相近，每一区组的 动物数即为组数。再从随机数字表上任意抄下随机 数字，依次标在每个动物的编号下，如欲将动物分 为４组，则将每一区组动物编号下的随机数字，按 顺序分别用４、３、２、１除之，根据余数大小将 动物分入各组。
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急性毒性试验项目
• 急性半数致死量测定 • 半数耐受限量测定 • 7d喂养试验 • 其他：近似致死量试验、固定剂量法、急性毒
性分级法、阶梯法、金字塔法、限量试验、急 性系统毒性试验等。
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急性毒性试验设计
▪ 实验动物选择
▪品种 ▪品系 ▪个体 性别 年龄 体重 生理病理状况
对外源化学物毒性反应与人近似； 易于饲养管理，方便实验操作； 原则 易于获得，品系纯化，价格低廉。
急性毒性试验方法
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一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h之 内多次接触外源化学物后，在短期内 所发生的毒性效应，包括致死效应。
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一次：指瞬间给实验动物染毒，如经 口、经静脉注射染毒。 24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
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实验动物的标记
➢ 染色法 ➢ 耳缘孔口法 ➢ 烙印法 ➢ 挂牌法
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染色法
用不同颜色的染料涂擦于动物不同部位来 表示不同号码，适用于大鼠、小鼠和豚鼠。 常用染料： 3％～5％苦味酸酒精饱和液，呈黄色； 甲基紫酒精饱和液，呈紫色； 0.5％中性红或品红溶液，呈红色等。
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实验动物的标记
方法一：
6
按右前肢、右肋、右后肢、颈部、背中、尾根、左
前肢、左肋、左后肢，顺序编号为1～9号，不染色
为10号。在动物相同部位涂染另一种颜色染料表示
十位，两种颜色可编1～99号。
方法二：
以头部为1号，顺时针方向依次从右耳、右前肢、右
后肢、颈部、背中、尾根、左耳、左前肢、左后肢
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强度与外 源化学物的性质和染毒剂量的大小有关。
如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯
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急性毒性试验目的
• 了解外源化学物急性毒性的强度，求出LD50
• 了解外源化学物毒作用的性质、毒效应的特征 及可能的靶器官，初步评价外源化学物的危险 性。
• 探求外源化学物的剂量-反应（效应）关系，为 亚慢性毒性、蓄积毒性和慢性毒性及特殊毒性 试验染毒剂量的设计和观察指标的选择提供参 考。
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用小动物试验可求出外源化学物对一种或几种 实验动物的急性LD50或LC50; 用大动物试验可求出近似致死剂量 （approximate lethal dose, ALD）;
根据LD50（LC50）值可进行急性毒性分级，以 初步评价外源化学物对机体急性毒性大小和急性
毒作用的强度。
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• 大鼠 120～150ｇ
• 小鼠 18～22ｇ
• 豚鼠 200～250ｇ
• 家兔 2～2.5 kg
• 犬 10～15kg（成年）
• 变异范围不得超过所用动物平均体重
的10％。
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急性毒性试验的动物要求
• 动物数量：小动物4～6组，每组至 少10只；犬等大动物每组6只。 • 性别：雌雄各半，也有例外，如，致 畸试验的剂量准备，只作雌性动物 LD50。 • 年龄：刚成年，未曾受孕、交配
常用方法：完全随机和随机区组
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完全随机设计
将实验动物编号，从随机数字表上任意横行或 纵行的任意数字开始，顺序取下数字，标于每个 动物号下，然后用计划组数去除随机数字，所得 余数即为所属组别。如将２０只动物分为４组， 从随机数字表的第１１行开始，顺序取２０个数 字，用４除的余数即为组别。
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20只动物的完全随机分配
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完全随机分配后各组所属动物号
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20只动物完全随机分配的结果
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20只动物的完全随机分配
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2 所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二
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烙印法： 将铸铁号码加热后，在动物体表部位烧烙，以 破坏毛囊，留下印记。适用于大动物。
挂牌法： 用金属或塑料制成号牌，固定在动物的耳部或 系于其颈部。适用于较大动物。
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实验动物分组
目的：减少个体差异对实验结果的影响；原则： 按统计学原则随机分组，使非处理因素最大限度地 保持一致，提高每组实验动物间的均衡性。
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完全随机分配后各组所属动物号
组别动Βιβλιοθήκη 编号一4 7 二1 59 12 8 13 20 14
三 2 6 10 15 18 19
四 3 11 16 17
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20只动物完全随机分配的结果
组别
动物编号
一 4 7 9 12 19
二1 三2
5 8 13 14 6 10 15 18