植物组织培养MS培养基配方
(一)母液配制与保存
配制培养基时,如果每次配制都要按着杨成分表依次称量,既费时,又增加了多次称量误差。
为了提高配制培养基的工作效率,一般将常用的基本培养基配制成10~200倍,甚至1000倍的浓缩贮备液,即母液。
母液贮存于冰箱中,使用时,将它们按一定的比例进行稀释混合,可多次使用,并在配制较多数量的培养基时,降低工作强度,也提高试验的精度。
基本培养基的母液有四种:大量元素(浓缩20倍),微量元素(浓缩100倍),铁盐(浓缩200倍),除蔗糖之外的有机物质(浓缩100倍)
1大量元素
配制大量元素母液时要分别称量,分别溶解,在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中,以防出现沉淀。
倒入磨口试剂瓶中,贴好标签和做好记录后,可常温保存或放入冰箱内保存。
2微量元素母液
在配制微量元素母液时,也应分别称量和分别溶解,定溶时不分先后次序,可随意加入溶量瓶中定容(表2),一般不会出现沉淀现象。
倒入磨口试剂瓶中,贴好标签和做好记录后,可常温保存或放入冰箱内保有存。
3铁盐母液
由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用,只有基螯合物才能被植物吸收利用,因此需要单独配成螯合物母液表3)。
配制方法:称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠,分别用450ml的去离子水溶解,分别适当加热不停搅拌,分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中,将两种溶液混合在一起,最后用去离子水定溶于1000mL,倒入棕色贮液瓶中,贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中。
4有机物母液
按表4中的量分别称取各种有机物,分别溶解后,用蒸馏水或去离子水定容于1000mL,放入细口瓶
配成1 mg/ml 。
各100 ml。
6-苄基腺嘌呤(6-BA)用0.5 N的HCl加热溶解。
萘乙酸(NAA)用少量无水乙醇溶解,再加蒸馏水。
6 Ms培养基配制程序
配好各种母液后,就可以准备配制培养基,程序入下
1.将已配好的的各种母液按顺序排好,根据母液倍数或浓度计算和吸取应相应时的各种母液和生长调节物质;计算和称取琼脂和蔗糖.1L培养基称蔗糖30g琼脂7g.
2.由于琼脂难溶解,所以先在烧杯中放入一定量的水,在微波炉里加热后搅拌,使之溶解.
3.按照大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液的顺序倒入锅中加热至沸后把溶解的琼脂加入。
4.加入蔗糖,特蔗糖溶解后,定溶所要体积。
5.调PH到5.6~5.8
6.分装到培养瓶中121℃21min灭菌后取出,放在水平台上凝固接种。
做愈伤组织时还应在每1L培养基中加入2mg/mL的2,4-D1mL,对于不同的材料,加入的量不同,根据不同的材料选择不同的浓度。
还可加入不同生长调节素达到更好的目的。