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实验一MS培养基的配制

实验一MS培养基的配制
一、实验目的:
了解MS培养基的配制原理和方法,掌握其配制过程和分装方法。

二、实验材料与仪器:
电子天平、量筒、烧杯、玻璃棒、组培瓶、移液器、6种母液、白沙糖、琼脂、氢氧化钠、盐酸、酸度计或pH试纸。

三、实验方法与步骤
1、母液配制
(1)大量元素(母液Ⅰ) (2) 微量元素(母液Ⅱ) (3) 铁盐(母液Ⅲ) (4) 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 和ⅣB (5) 植物生长调节物质(6-BA,NAA)以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为100倍浓缩液。

2、1 L固体MS培养基配制
(1)用电子天平称出8 g琼脂粉和 30 g蔗糖放在烧杯中,加入少量的蒸馏水在微波炉中加热使之溶解。

(2)用量筒从各种母液中分别取出所需的用量:母液Ⅰ为50 ml,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB 各10ml。

(3)最后用蒸馏水定容到1 L;用 2 mol/L NaOH 或 2 mol/LHCL 溶液调节培养基的 pH 值至 5.8~6.0。

(4)用量筒量取100ml液体培养基分装在组培瓶里,再用移液器取适量的6-BA和NAA放入组培瓶里。

(5)在 1.1kg/cm2 压力(约 121℃)高压灭菌锅中灭菌 15~20 min;灭菌后,放置于室温自然冷却凝固待用。

3、实验分组
本实验分五组,每组负责配制一组培养基组合:
(1)MS+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA
(2)MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA
(3)MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA
(4)MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA
(5)MS+3mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA
4、其他需要灭菌的实验材料
剪刀、镊子、蒸馏水、滤纸、培养皿、组培瓶。

四、分析
1.MS母液分得更加细,一般实验室只分大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四大类。

这里将大量元素中钙离子与硫酸根离子分开配,避免产生不溶物,将硼酸也单独列出来。

另外,培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累。

2. 配固体MS培养基时一定要调pH值,如果pH值较小,培养基不易凝固。

3. 有些激素可以高压灭菌,如6-BA和NAA,有些则不能高压灭菌,如IAA 和玉米素(ZT)。

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