• 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可 能存在的微生物污染培养物
• 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束 后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接 种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而 通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目 逐渐减少，以便得到菌落
• 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残 留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
(2)常用灭菌的方法：
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：160170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌：100kPa、 121 ℃下维持15-30min.
称量-计算-溶化-灭菌-倒平板
灭菌：加上封口膜，用牛皮纸包好放在高压蒸汽灭 菌锅中灭菌，1Kg压力灭菌15Min
紫外灯，过滤风，酒精灯，酒精棉球 在火焰旁右手3指拿锥形瓶，2指拿封口膜 使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰 左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培
实验1：大肠杆菌的培养和分离
单细胞原核，分支状的菌丝（基内~、气生~）
芽孢：细菌的休眠体
结构 异养型，兼性厌氧型，革兰氏阴性(红色)(G-) 物质(元素)组成：C H O N P S…
按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生 长繁殖的营养基质。
液体培养基 扩大培养，工业生产
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谢谢！
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养皿，立刻盖上皿盖 待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置
从大肠杆菌斜面→锥形瓶中的液体培养基 接种好后在37度摇床振荡培养12h 工具：接种环在接种前要灭菌
分离方法：平板划线分离法
原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表 面。在数次划线后，可以分离到由一个细胞繁殖而 来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。
只能蘸一次、再次划线从上次末端开始、划好倒置 培养1-2天、划线末端出现不连续的单个菌落
灼烧接种环
冷却
蘸取菌液
灼烧接种环
冷却
灼烧接种环 灼烧接种环
冷却 冷却
划线 （第一区域）
划线 （第二区域）
划线 （第三种环
冷却
平板倒置放置培养
划线 （第五区域）
灼烧接种环
第五区域 第四区域
第一区域 第二区域
第三区域
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1.为什么在操作的第一步以及每次划线 之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时， 仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
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2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进 行划线？
• 以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么 总是从上一次划线的末端开始划线？ • 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处
消毒：较为温和的方法，如酒精 注：消毒不能杀死芽孢
灭菌：强烈，所有，完全无菌
灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重 要的技术。
(1)常用消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min（牛奶） 3、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯 气消毒水源 4、紫外线消毒（空气）
要少，每次从上一次划线的末端开始，能使 细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少， 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
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将单菌落用划线法接种到斜面，37度培养24h后放 入4度冰箱保藏
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凝固剂 琼脂
固体培养基 分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏
选择培养基 鉴定培养基
天然培养基 合成培养基
成分 碳源 氮源 无机盐
水 生长因子
作用
主要作能源物质 合成含N类化合物
调节渗透压等
主要来源
无机碳(CO2) 或有机碳(糖类)
N2，NH3，铵，硝酸盐 尿素，牛肉膏，蛋白胨
调节促生长
维生素，AA，碱基等