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生化实验技术 离心技术


S,T 和K之间的关系
K 最高转数 T =--------------- x (-------Βιβλιοθήκη --------)2 S 实际转数
离心能够获得纯净样品吗?
1.在混合溶液中,通过离心技术一 般不能获得纯净的样品。 2.通过对离心沉淀颗粒的溶解再离 心一般可以增加沉淀颗粒的纯度, 即所谓对沉淀的“洗涤”。 3.对沉淀的“洗涤”可以提高沉淀 的纯度,但同时也必然造成沉淀 样品的丢失。
离心技术的基本目的
1.最大程度地富集目的颗粒。 2.最大程度地减少非目的颗粒。
问题是在同一离心力作用下,所有的颗粒均会以 不同的速度沉淀。如何能够有效的达到上述的 基本目的,这就是我们要考虑和必须回答的问 题。
离心技术的几个重要基本概念
1.沉降速度(S):我们要了解和比较不同 颗粒的沉降速度。 2.澄清时间(T):一般而言,离心不是离 心时间越长越好,我们要确定或估算最 佳的离心时间。 3.K因子:完成同样的工作,不同的离心 机或转头效果不同,我们要规范地评价 离心机或转头的效率。
F=ω
2r
ω (角速度,单位 弧度/秒)
=2π(rpm/60) rmp= 转数/分钟 r =离心半径(cm)
影响离心力的两大因素
1. 离心机转数(rpm) 2. 离心半径(r )
换用不同型号的离心机时,你不能只考 虑离心机转数而忽视离心机半径。不同 型号和半径的离心机在相同转数时会产 生大小不同的离心力,也就会产生不同 的离心效果。
1.颗粒的沉降系数S主要决定于颗粒与溶液 的密度差,也与颗粒的形状和溶液的黏 度等因素有关,因此S值的研究可用于分 子量的测定和分子构象的研究,在核酸 的研究中,s值也常常被用来表示生物大 分子的特征。 2.原核生物的核蛋白体为70S,其由30S的 小亚基和50S的大亚基组成;而真核生 物的核蛋白体为80S,其由40S的小亚基 和60S 的大亚基组成。
澄清时间(T值)--1
1.所谓澄清时间就是在特定的离心 条件下位于离心管顶的颗粒到达 离心管底所需要的最短时间。 2.确定澄清时间具有重要的意义, 因为短于澄清时间,不能获得全 部的离心目的颗粒;长于澄清时 间,不仅是时间和设备的浪费, 而且有可能使非目的颗粒增加。
澄清时间(T值)--2
1 Lnrt - Lnr0 t1-t0 = ---- x ---------------S
ω2
澄清时间与颗粒的沉淀系数S成反比, 与离心机的重要参数( Lnrt - Lnr0) /ω2成正比,即与所使用的离心机或 使用的转头有关。
转头的特征性常数—K因子
1. K因子是表示转头离心效率的指标。 2. 确定转头K因子的因素有两个:一 是离心的距离(r);二是允许的最 高转数(角速度ω)。 3. K factor = Lnrt - Lnr0 / ω2 ω 是指该转头的最大允许角速度
沉降系数 S--1
1. S 为沉降系数(sedimentation coefficient) 的简称。 2. 沉降系数是被分离颗粒在单位离心力 场下的沉降速度。S=dr/dt x 1/w2r 3. 沉降系数的单位为10-13秒,简称S, 以纪念超速离心机的创始人 Sverdberg
沉降系数--2
相对离心力(RCF)
RCF (relative centrifuge force) RCF= ω2r/980 (单位为 g) = (2πrpm/60)2 r/980 X g = (0.1047rpm)2/980r X g = 11.2 x (rpm/1000)2 r X g g 就是标准条件下的地心引力
你能回答遇到过这些的问题吗
1.离心力的大小是由那些因素决定的? 2.不同型号的离心机可以互换使用吗? 3.什麽是相对离心力?g代表什麽? 4.离心时间越长是否离心效果越好? 5.科学的离心时间是如何决定的? 6.离心一般能获得纯净的样品吗? 7.如何能获得满意的重复离心效果?
感 谢 光 临
再 见
生化实验技术
离心技术
你能回答遇到过这些的问题吗
1.离心力的大小是由那些因素决定的? 2.不同型号的离心机可以互换使用吗? 3.什麽是相对离心力?g代表什麽? 4.离心时间越长是否离心效果越好? 5.科学的离心时间是如何决定的? 6.离心一般能获得纯净的样品吗? 7.如何能获得满意的重复离心效果?
离心力的影响因素
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