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五、抗体酶
五、抗体酶 （abzyme） ） 抗体酶本质上是免疫球蛋白， 抗体酶本质上是免疫球蛋白，但在易变区被赋予了 免疫球蛋白 酶的属性，所以又称“催化性抗体” 酶的属性，所以又称“催化性抗体”（catalytic antibody）。 ）。 抗原： 抗原：
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二、调节酶
• 调节酶是对代谢调节起特殊作用的酶类。 调节酶是对代谢调节起特殊作用的酶类。 • 调节酶分子中有活性区和调节区，其催化活力 调节酶分子中有活性区 调节区， 活性区和
可因与调节剂的结合而改变， 可因与调节剂的结合而改变，有调节代谢反应 的功能。 的功能。
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三、酶的纯度鉴定
酶产品质量评价中常使用比活力， 酶产品质量评价中常使用比活力， 比活力越高，纯度越高。 比活力越高，纯度越高。
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第七节 一些酶的名称及概念介绍
寡聚酶( ) 一 寡聚酶(oligoenzyme)
酶分子的非催化部位与某些化合物可逆地 酶分子的非催化部位与某些化合物可逆地 非催化部位 非共价键结合后引起酶分子构象的改变， 非共价键结合后引起酶分子构象的改变， 进而改变酶的活性状态， 进而改变酶的活性状态，这种现象称为别 构调节作用。 构调节作用。
别构激活作用 别构抑制作用
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三、同工酶
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四、诱导酶 诱导酶(induced enzyme ) 四、诱导酶
诱导酶:在环境中， 诱导酶:在环境中，加入特定的诱导物后产生 的酶。 的酶。 特点：酶的存在是有时间性的， 特点：酶的存在是有时间性的，是有条件的 。 典型的例子就是大肠杆菌体内的半乳糖苷酶。 典型的例子就是大肠杆菌体内的半乳糖苷酶。 组成酶： 组成酶：
2. 酶的活力单位（U, active unit） 酶的活力单位 活力单位（ ）
度量单位，表示酶量的多少。指在一定条件下，一定时间内将一定量 度量单位，表示酶量的多少。指在一定条件下， 的底物转化为产物所需的酶量。 的底物转化为产物所需的酶量。U/mL。 。 IU：指在最适反应条件下，1分钟内催化 µmol底物转化为产物所需的 ：指在最适反应条件下， 分钟内催化 分钟内催化1µ 底物转化为产物所需的 酶量。 酶量。
(antigen)凡是能引起免疫反应的任何分子或细胞。 (antigen)凡是能引起免疫反应的任何分子或细胞。 凡是能引起免疫反应的任何分子或细胞
半抗原： 半抗原： E与S作用形成的过渡态结构设计合成的一些类似物。 作用形成的过渡态结构设计合成的一些类似物。 据 意义： 意义：设计新药的思路
•
判断分离纯化方法的优劣， 判断分离纯化方法的优劣，通常用两个指标来 衡量： 衡量： 总活力的回收：表示提纯过程中酶的损失情况。 总活力的回收：表示提纯过程中酶的损失情况。 纯化倍数：表示提纯方法的有效性。 纯化倍数：表示提纯方法的有效性。
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二、酶活力的测定
提纯的目的： 提纯的目的： 步骤： 步骤：
• 选材 • 破碎细胞 • 抽提 • 分离及纯化 • 保存
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一、分离纯化
由于酶的特殊性， 由于酶的特殊性，在提纯过程中要注意 :
1．全部操作在低温0～4℃。 全部操作在低温0 4℃。 2．在分离提纯过程中，不能剧烈搅拌。 在分离提纯过程中，不能剧烈搅拌。 3．在提纯溶剂中加一些保护剂，如少量EDTA、 在提纯溶剂中加一些保护剂，如少量EDTA、 EDTA 少量β 巯基乙醇。 少量β-巯基乙醇。 4．在分离提纯过程中要不断测定酶活力和蛋白质浓 在分离提纯过程中要不断测定酶活力和蛋白质浓 度，从而求得比活力，还要计算总活力。 从而求得比活力，还要计算总活力。 比活力 总活力
正协同效应 负协同效应
当一种配基与酶蛋白结合后，新构象的形成促进后 当一种配基与酶蛋白结合后， 续配基与酶蛋白的结合。 续配基与酶蛋白的结合。
亚基构象的改变能够传递， 亚基构象的改变能够传递，从而改变与底 物结合的速度，产生协同效应。 物结合的速度，产生协同效应。
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、酶
分光光 度法： 度法： 荧光光 度法： 度法： 恘 法： 性 法： 法：
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的 定
酶 活 力 的 测 定 方 法
如果酶促反应的产物具有光吸收性质 如果酶促反应的产物具有光吸收性质 可见光、紫外光）， ），或反应产物进 （可见光、紫外光），或反应产物进 行一定反应后具有光吸收性质。 行一定反应后具有光吸收性质。 方便，常用。 方便，常用。 底物或产物具有荧光性质。 底物或产物具有荧光性质。 荧光性质 灵敏度高。 灵敏度高。 反应 有 的 ，可惣用 定。 ，可惣用 定法 定。 方便，常用。 方便，常用。 的底物进行酶 用 性 的底物进行酶 促反应， 促反应， 定产物的 。 灵敏度高， 常用。 灵敏度高， 常用。
二 调节酶
同工酶(isoenzyme) 三 同工酶
四 诱导酶 诱导酶(induced enzyme) 五 抗体酶(abzyme) 抗体酶( 六 固定化酶 固定化酶(immobilized enzyme)
核酶(ribozyme) 七 核酶
八 与人类健康有关的其它一些酶
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• 调节酶一般可分为共价调节酶及别构调节酶。 调节酶一般可分为共价调节酶及别构调节酶。 共价调节酶
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二、调节酶
（一）别构调节酶
1. 别构酶的特点和性质 (1)概念：具有别构调节作用的酶称为别构酶。 (1)概念：具有别构调节作用的酶称为别构酶。 概念 别构调节作用? 别构调节作用? (2)别构效应: (2)别构效应: 别构效应 效应物（ 效应物（effector）： ）： 别构效应
比活力（ 3. 酶的比活力（specific activity） 酶的比活力 ）
指每mg蛋白质所具有的酶活力单位， 蛋白质来表示。 指每 蛋白质所具有的酶活力单位，一般用 U/mg蛋白质来表示。 蛋白质所具有的酶活力单位 蛋白质来表示
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二、酶活力的测定
二、调节酶
（二）共价调节酶 什么是共价调节酶？ 什么是共价调节酶？
调节剂通过共价键与酶分子结合， 调节剂通过共价键与酶分子结合， 以增加、或减少酶分子上的基团， 以增加、或减少酶分子上的基团， 从而调节酶的活性状态与非活性状 态的相互转化， 态的相互转化，这种调节酶称为共 价调节酶。 价调节酶。
共价修饰类型： 共价修饰类型：
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三、同工酶
1、功能
催化的反应
心肌: 心肌: 骨骼肌: 骨骼肌:
乳酸 乳酸
LDH1 LDH5
丙酮酸 丙酮酸
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三、同工酶
2、组成和电泳行为 、
HHHH (LDH1) HHHM (LDH2) HHMM (LDH3) HMMM (LDH4) MMMM (LDH5)
一、寡聚酶
寡聚酶(oligoenzyme) 一、寡聚酶(oligoenzyme) 1.特点：由两个及两个以上的亚基组成的酶。 1.特点：由两个及两个以上的亚基组成的酶。 特点 2.类型： 2.类型： 类型 含有相同亚基的寡聚酶： 含有相同亚基的寡聚酶： 含不同亚基的寡聚酶： 含不同亚基的寡聚酶： A．双功能寡聚酶：每种亚基表现不同的功 双功能寡聚酶： 因而整个酶分子催化两个相关的反应 整个酶分子催化两个相关的反应， 能，因而整个酶分子催化两个相关的反应，这种寡 聚酶称为双功能寡聚酶 双功能寡聚酶。 聚酶称为双功能寡聚酶。
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二、调节酶
负协同效应别构酶与米氏酶动力学比较
对底物浓度敏感 对底物浓度不敏感
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二、调节酶 2．别构酶举例 ．
• 天冬氨酸转氨甲酰酶 天冬氨酸转氨甲酰酶（ATCase）
(1) 催化反应及动力学曲线
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二、调节酶
(2) 序变模型（sequential model，也称 序变模型（ 模型） ，也称KNF模型） 模型 1966年由 年由Koshland、Nemethy和Filmer提出。 提出。 年由 、 和 提出 该模型的要点 :
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一、寡聚酶
一个亚基具有催化功能 具有催化功能， B．一个亚基具有催化功能，另一个亚基无 催化活性，但可以改变第一个亚基的催化反应 催化活性，但可以改变第一个亚基的催化反应 专一性，从而使反应发生。 专一性，从而使反应发生。 C．一个酶分子中有的亚基有酶活性，有的 一个酶分子中有的亚基有酶活性 酶活性， 亚基只是底物的载体而不具酶活性， 底物的载体而不具酶活性 亚基只是底物的载体而不具酶活性，也不改变 其他亚基的活性。 其他亚基的活性。
第六节 酶的分离提纯及活力测定
一 二 三
分离纯化 (principles of purification) 酶活力的测定(determination of activity ) 酶的纯度鉴定(identification of purity)