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D．四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25
②一同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，
那么每毫升样品中的大肠杆菌数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2
mL)________。
③用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量________，因为
，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，
就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。
(1)培养材料的取材应很好地加以选择，老的材料比幼嫩的材料带菌
多，田间比温室生长材料带菌多。
山
(2)消毒材料不彻底，植物组织只能进行表面灭菌，对材料内部所带
东 金
的细菌、霉菌等杂菌往往难以对付，可在培养基中添加抗生素解决
有
并冷却至45 ℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，
限 公
待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间后即可出
司
现菌落。
在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细
胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。随后挑取该单个菌落，或
重复以上操作数次，便可得到纯培养。由于大肠杆菌属于兼性厌氧
司
1．自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一
般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进
行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下：
(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。
(2)为了得到更加准确的结果，你选用________________(平板划线
菌，为了得到更加准确的结果，最好选用稀释混合平板法。统计菌
落数计算的平板越多，其平均值越接近实际值。但是C选项中出现
一个菌落数只有5的结果，不可信，因此答案选D。 。计算公式：
每克样品中的菌株数＝C/V×M，其中C代表某一稀释度下平板上
生长的平均菌落数，V代表稀释平板时所用的稀释液的体积(mL)，
M代表稀释倍数。用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的
法、稀释混合平板法、稀释涂布平板法)接种样品。
(3)适宜温度下培养。 结果分析：
山 东 金
①测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以
太 阳
下几种统计结果，正确可信的是( )
书
A．一个平板，统计的菌落数是23
业 有
B．两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24
限
C．三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26
山 东
数量多，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一 金
个菌落。在培养基上还有其他杂菌的菌落，其原因可能有多种，一
太 阳
是大肠杆菌被污染了，二是培养基被污染了，三是培养过程中被污 书
染了。
业 有
答案：(2)稀释混合平板法 (3)结果分析：①D ②1.17×108 ③多 限
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落 ④不
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能，因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程
2．影响果胶酶活性的实验设计技巧
在设计实验检验影响果胶酶活性的因素时，要注意以下几点：
(1)无论是研究温度，还是研究pH对酶活性的影响时，注意设
置合适的梯度。
(2)实验时，要保证酶促反应在恒温或恒定酸碱度的条件下进
行，否则，会影响实验结果。
山
(3)必须设计对照实验，这就要求在实验中，所用一切试剂，
在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生
东 金
物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，经培养后， 太
可在平板表面得到单菌落。稀释倒平板法又分为稀释涂布平板法和稀释
阳
混合平板法。稀释涂布平板法就是将稀释后的菌液分别涂布在固体培养
书 业
基的表面进行培养；稀释混合平板法就是将不同浓度的稀释液与已溶化
太 阳
。
书
业 (3)人为污染，如使用未消毒工具或呼吸排出细菌；手接触材料或器 有
皿边缘，使用过的工作器具未消毒而再继续使用，造成交叉污染；
限 公
接种室空气污染，使真菌孢子在培养基上繁殖。
司
2．(2011年广州测试)下图是月季花药离体培养产生花粉植株的两种途 径，请据图回答有关问题：
(1)选用的材料合适与否是能否成功诱导出花粉植株的重要因素，一
东 金
包括蒸馏水，都要做到量的一致性，保证唯一变量，尽量避免干
太 阳
扰因素。
书 业
(4)梯度实验，是无法得到酶的最适温度或最适酸碱度的，只
有 限
能得到一个大致的适宜范围。
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3．归纳外植体污染的原因
植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要
求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长
般来说选用________期的花粉可提高成功率。选择花粉时，一般要通
山 东
过________来确定花粉是否处于合适的发育期，这时需要对花粉的细 金
落。
④注意事项：a.设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b.为了
保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
山
⑤计算公式：每克样品中的菌株数＝C/V×M，其中C代表某一稀
东 金
释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液
太 阳
的体积(mL)，M代表稀释倍数。
书 业
有
限
公
__________________________________。
④某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌
落，能否据此肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？
______________________________________。
解析：平板划线分离法是指由接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料， 山
山 东 金 太 阳 书 业 有 限 公 司
山 东 金 太 阳 书 业 有 限 公 司
山 东 金 太 阳 书 业 有 限 公 司
1．统计微生物数目的方法
(1)显微镜直接计数法
①原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算
一定容积的样品中微生物的数量。
②方法：用计数板计数。
山
东
③缺点：不能区分死菌与活菌。
金
太
(2)间接计数法(活菌计数法)
阳 书
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌
业 有
落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，
限 公
就能推测出样品中大约含有多少个活菌。
司
②方法：平板划线法、稀释混合平板法、稀释涂布平板法。
③缺点：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌