第二章核酸杂交技术（一）名词解释1．原位杂交2．核酸分子杂交技术3．探针4．反向点杂交5．缺口平移标记法6．随机引物标记法7．末端标记法8．Southern blot杂交9．荧光原位杂交10．菌落杂交（二）选择题【A型题】1．DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（）A G－C含量B A－T含量C A－G含量D A－C含量E T－G含量2．液相杂交是下列哪一种（）A Southem印迹杂交B Northem印迹杂交C Dot印迹杂交D Slot印迹杂交E RPA实验3．研究得最早的核酸分子杂交种类是（）A 菌落杂交B Southern杂交C Northern杂交D 液相杂交E 原位杂交4．Southern杂交通常是指（）A DNA和RNA杂交B DNA和DNA杂交C RNA和RNA杂交D 蛋白质和蛋白质杂交E DNA和蛋白质杂交5．最容易降解的核酸探针是( )A cDNA探针B dsDNA探针C ssDNA探针D gDNA探针E: RNA6．探针基因芯片技术的本质就是（）A 核酸分子杂交技术B 蛋白质分子杂交技术C 聚合酶链反应技术D 基因重组技术E 酶切技术7．DNA探针的长度通常为( )A 1000 ～ 2000个碱基B 500 ～ 1000个碱基C 400 ～ 500个碱基D 100 ～ 400个碱基E. <100个碱基8．寡核苷酸探针的最大的优势是（）A 杂化分子稳定B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列C 易标记D 易合成E 易分解9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( ) A 甲醛B 乙醛C 氢氧化钠D 碳酸钠E 盐酸10．盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是（）A 脆性大B 本底低C 共价键结合D 非共价键结合E 高结合力11．最常用的DNA探针标记方法是( )A 随机引物B 切口平移C 3′ -末端标记D 5′ -末端标记E PCR法12．为了除去探针，重复使用滤膜，以下哪种情况不可以发生（）A 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经干燥过B 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经湿润过C 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经温浴过D 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经漂洗过E 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经标记过13．5′一末端的DNA探针标记主要依靠的酶是( )A T4多聚核苷酸激酶B 末端转移酶C AKPD DNA polⅡE DNA pol14．血友病是一种（）A 染色体病B X连锁遗传病C 先天性代谢缺陷病D 先天畸形E 常染色体隠性遗传病15．预杂交中最常用的封闭剂是( )A Denhavdt's溶液B 5×TBEC 1×TBED 1×TAEE 1×TPE16．检测目标是RNA的技术是（）A Southern杂交B Western杂交C Northern杂交D Eastern杂交E 杂交淋巴瘤17．检测靶序列是DNA的技术是（）A Southern杂交B Western杂交C Northern杂交D Eastern杂交E 杂交淋巴瘤18．DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA 分子成为单链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针19．具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针20．一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针21．点/狭缝杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测22．放射自显影时反射光产生的潜影在低温下较稳定，最适温度是( )A -70℃B -30℃C -20℃D -10℃E 4℃23．Southern印迹杂交可以用于（）A 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B 检测的目标是RNAC 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测24．寡核苷酸探针的Tm简单计算公式为( )A Tm=4(G+C)+2(A+T)B Tm=2(G+C)+4(A+T)C Tm=6(G+C)+4(A+T)D Tm=2(G+C)+6(A+T)E Tm=6(G+C)+2(A+T)25．Northern印迹杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C 检测的目标是RNAD 用于基因定位分析E 阳性菌落的筛选2626．荧光原位杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 检测的目标是RNAC 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测27．以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为（）A 正常人B 杂合体患者C 纯合体患者D 携带者E 不能确定28．在pH为下述何种范围时，Tm值变化不明显( )A pH为3～5B pH为4～5C pH为5～6D pH为5～9E pH为8～1129．一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为（）A 2-10bpB 17-50bpC 60-100bpD 100-200bpE 200-300bp30．变性剂可使核酸的Tm值降低，常用的变性剂是( )A 甲酰胺B 氢氧化钠C 浓盐酸D 稀盐酸E 甲醇31．下列有关cDNA探针的描述不正确的为（）A 利用mRNA通过RT-PCR在体外反转录可制备大量的cDNA探针B cDNA探针不包含内含子C cDNA探针不包含大量的高度重复序列D 由于cDNA探针自身所携带的poly（dT），有可能产生非特异性杂交的问题E cDNA探针合成方便，成为探针的重要来源32．一般来说核酸杂交的温度低于其Tm值的多少度进行( )A 15～25℃B 10～15℃C 5～10℃D 30～40℃E 40～50℃33．对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其Tm 值( )A 30～40℃B 20～30℃C 15～30℃D 10～15℃E 5℃34．一般情况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反应常在多少℃下进行( )A 90B 80C 75D 68E 5835．在含50%甲酰胺时，杂交反应在多少℃进行( )A 70B 65C 55D 42E 3536．杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加1%，则Tm值下降( )A 0.5℃B 1～1.5℃C 2～2.5℃D 3～3. S℃E 4～4.5℃37．RNA/RNA的杂交体的Tm值一般应增加( )A 1～5℃B 5～10℃C 10～15℃D 15～20℃E 20～25℃38．杂交的时间一般为Cot1/2的( )A l倍B 1～3倍C 3 ～5倍D 5～8倍E 10倍以上39．为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入( )A ssDNAB 1×SSCC 10×SSCD 5×TBECE 50×TAE40．随机引物法标记探针常用的A、G、C、T聚合体的数目是( )A 4个B 6个C 8个D 10个E 12个【X型题】41．下列哪些是影响DNA复性的因素( )A DNA浓度B DNA的分子量C 温度D 碱基组成E DNA的来源42．DNA探针的优点有（）A 制备方法简单B DNA探针易降解C DNA探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择D 克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽E 单链，不存在竞争性的自身复性43．以下哪些方法可以用于探针的全程标记（）A DNA加尾法B DNA切口平移标记法C 随机引物标记法D 末端标记E 尾端标记44．关于DNA变性的描述正确的是( )A 二级结构破B 一级结构破坏C 黏度降低D 生物活性丧失E 浮力密度增加45．以下哪些因素可以使DNA变性（）A 增加溶液的浓度B 加热C 改变溶液的pH值D 有机溶剂E 冷藏46．预杂交中，下列能起封闭作用的是( )A ssDNAB BSAC 小牛胸腺DNAD 脱脂奶粉E DTT47．变性的DNA会发生哪些理化性质的变化（）A 粘度下降B 沉降速度增加C 浮力下降D 紫外光吸收增加E 紫外光吸收减少48.下列物质适于非放射性探针标记的是( )A AKPB ACPC 生物素D 地高辛E 荧光素49．关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述正确的是( )A 特异性高B 可依赖氨基酸序列推测其序列C 分子量小D 可用于相似基因顺序差异性分析E 可用末端转移酶进行5′端标记50．通过哪些措施可以提高杂交反应的速度（）A 采用大片段探针B 少量的反应体积C 高反应温度D 不断的振摇E 大量的反应体积51．关于切口平移法下述正确的是( )A 可标记线性DNAB 可标记松散螺旋DNAC 可标记超螺旋DNAD 可标记存在缺口的双链DNAE 可标记随机引物52．以下哪些方法可以用于从凝胶上转移DNA（）A 毛细转移B 真空转移C 负压转移D 电泳转移E 冷冻转移53．关于随机引物法标记探针下述正确的是( )A 可标记单链DNAB 可标记双链RNAC 可标记单链RNAD 比活性高达108cpm／µg DNA以上E 常经过SephadexG-50纯化才可使用54．可以采用哪些方法来标记探针（）A 杂交标记法B 切口平移标记法C 5’-末端的标记D 3’-末端的标记E 化学法延长标记55．整个杂交反应主要以下哪些步骤组成（）A 预杂交B 杂交C 洗脱D 固定E 转移56．放射自显影可以被分为（）A 直接放射自显影B 氧化显影C 封闭显影D 间接放射自显影E 固定显影57．关于电转移下列描述正确的是( )A 快速、高效B 需要特殊设备C 缓冲液用TAE或TBED 可产生高温E 常用NC膜作为支持介质58．预杂交的主要目的是（）A 平衡滤膜B 封闭非特异性杂交的位置C 提高杂交信号的检测效率D 便于从滤膜上除去探针E 清除用于杂交反应检测的显色物质59.关于非放射性探针标记，下列描述正确的是( )A 对人体危害小B 需要特殊设备C 可长时间使用D 灵敏度不如放射性探针E 重新杂交新探比较容易60．对于改变DNA片段长度的突变，可以由于缺失或插入产生，或由于限制性酶切位点改变而导致限制性片段长度改变。

可以通过哪些方法检测（）A PCR扩增B RAPDC Southerm印迹杂交D Northern印迹杂交E 以上都不是61．重组DNA的筛选可用核酸分子杂交的方法，常用于检测DNA的杂交方法有哪些（）A 菌落印迹杂交B Northern印迹杂交C Western印迹杂交D 原位杂交E 斑点杂交62．关于RNA探针的描述下列正确的是( )A 可用于随机引物标记B 特异性高C 灵敏度高D 可用非同位素标记法标记E 不易降解63．下列哪些可以作为核酸探针使用（）A microRNAB 单链DNAC 寡核苷酸D mRNAE 双链RNA64．关于核酸探针的描述下列正确的是( )A 可以是DNAB 可以是RNAC 可用放射性标记D 可用非放射性标记E 必须是单链核酸（三）问答题1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？2．简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围3．试述Northern blot杂交的操作步骤？4．什么是肽核酸？并简述其应用？5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用。