植物生理学实验（第一版）目录实验一质壁分离法测定植物组织的渗透势 (2)实验二植物体内硝态氮含量的测定 (4)实验三叶绿素a，b含量的测定 (5)实验四赤霉素对水稻α--淀粉酶的诱导形成 (6)实验五植物呼吸强度的测定 (7)实验六种子活力的快速测定—氯化三苯基四氮唑(TTC)法及红墨水法 (8)实验七丙二醛含量的测定 (11)实验一质壁分离法测定植物组织的渗透势[实验目的]观看植物组织在不同浓度溶液中细胞质壁分离的产生进程及其用于测定植物组织渗透势的测定[实验原理]原生质层（细胞膜、原生质、液泡膜）具有选择透过性，近似于半透膜，一个成熟的植物细胞确实是一个完整的渗透装置：当外界溶液浓度大于细胞液浓度时(高渗溶液），细胞失水，发生质壁分离；当外界溶液浓度小于细胞液浓度时（低渗溶液），细胞吸水；当植物组织细胞内的汁液与其周围的某种溶液处于渗透平稳状态，当外界溶液浓度等于细胞液浓度时（等渗溶液），植物细胞内的压力势为零时，细胞汁液的渗透势就等于该溶液的渗透势。

细胞水势等于细胞液的渗透势等于外界溶液渗透势。

将植物组织置于对其无迫害的一系列不同浓度的溶液里处置一按时刻，然后镜检发生质壁分离的情形，细胞的等渗浓度将界于方才引发初始质壁分离的浓度和不能引发质壁分离的浓度之间。

代入公式即可计算渗透势。

[材料、器材与试剂]1 实验材料洋葱表皮2 实验仪器显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，刀片，培育皿，记号笔，滴管。

3 实验试剂别离配制、、、、、、、、L的蔗糖溶液，贮9个试剂瓶中。

称34.23g蔗糖用蒸馏水配成100ml，其浓度为1mol/L(母液)。

再配制成以下各类浓度：L：吸母液25ml+水25mlL：吸母液+水L：吸母液+水L：吸母液+水L：吸母液+水L：吸母液+水L：吸母液+水L：吸母液+水L：吸母液+水[方式与步骤]1. 取6套干净清洁的小培育皿，用记号笔编号，将配制好的不同浓度的蔗糖溶液按顺序倒入各个培育皿中使成一薄层，盖好皿盖。

3.选用有色素的洋葱鳞片的外表皮迅速别离投入各类浓度的蔗糖溶液中，每一个培育皿中放材料3个左右，使其完全浸没，浸泡20分钟左右。

4. 到时后，掏出表皮，放在载玻片上，滴一滴相同浓度的蔗糖，盖上盖玻片，在显微镜下观看质壁分离的细胞数若是所有的细胞都产生质壁分离现象，那么取低浓度溶液中的制片做一样的观看，并记录质壁分离的相对程度。

5. 在实验中确信一个引发半数以上细胞原生质方才从细胞壁角隅上分离的最低浓度，和不引发质壁分离的最高浓度。

6. 在找到上述浓度极限时，用新的溶液和新鲜的叶片重复进行几回，直到有把握为止。

在此条件下，细胞的渗透势与两个极限溶液浓度之平均值的渗透势相等。

求得C1按下式计算渗透势ψπ =-iRTC1ψπ为细胞渗透势(bar)；R为气体常数*105L.Pa/mol·K)；T为绝对温度(273+t℃)；i解离系数，蔗糖为1；C1等渗溶液的质量摩尔浓度，单位是mol/kg；实验二植物体内硝态氮含量的测定[实验目的]硝态氮是植物最要紧的氮源。

植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供给情形，因此可作为土壤肥氮肥的指标。

测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情形，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

[实验原理]在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反映，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在必然范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。

[材料、器材与试剂]1 实验材料白菜叶片。

2 实验仪器722型分光光度计、电子天平。

3 实验试剂（1） 500ppmNO3-标准溶液精准称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。

（2） 5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml，浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。

置冰箱保留一周有效。

（3）8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1升无离子水中即可。

[实验步骤]1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml别离放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10、20、30、40、60、80、100、120ppm的系列标准溶液。

（2）吸收上述系列标准溶液，别离放入刻度试管中，以无离子水代替标准溶液作空白，再别离加入水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液整体积为101ml。

（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。

以NO3-N浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品中硝酸盐的测定（1）样品液的制备，取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2-3克别离放入三支刻度试管中，加入10ml无离子水，用玻璃塞封口，置入滚水浴中提取30分钟，到时刻后掏出，用自来水冷却，将是取液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。

（2）样口液的测定吸取样品ml分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸一硫酸溶液ml，混匀后置室温下20分钟，再慢慢加入9. 5 ml 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测期吸光度。

在标准曲线上查得或用回归方程计算出NO3-—N浓度，再用下公式计算其含量。

实验三叶绿素a、b含量的测定[实验目的]熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a和b的方式及其计算。

[实验原理]若是混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰尽管有明显的不同，但吸收曲线彼此有重叠，在这种情形下要别离测定两个组分，可依照朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律，通过代数方式，计算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的阻碍，最后别离取得两种组分的含量。

依照叶绿素a和b的吸收光谱曲线，叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b的最大吸收峰在645nm, 吸收曲线彼此又有重叠。

依照朗伯-比尔定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD 之间有如下关系：OD1=C a·k a1+C b·k b1(1) OD2=C a·k a2+ C b·k b2 (2)式中，k a1、k a2、k b1、k b2别离为组分a、b在浓度1g/L时，对应波长为λ1、λ2、λ1、λ2时的光密度OD值，即比吸收系数。

波长/nm 叶绿素a 叶绿素b663645将表中数值代入（1）、（2）式，并解方程可得：C a= (3) C b = (4).将单位改成mg/L，于是总叶绿素浓度为C T= C a +C b= OD663+ OD645 (5)[器材与试剂]1 实验仪器高级型分光光度计，离心机，天平，剪子，研钵，漏斗，移液管等。

2 实验试剂丙酮，碳酸钙，石英砂。

3 实验材料大叶黄杨叶片。

[实验步骤]称取新鲜叶片0.5g —→加纯丙酮5ml研磨成匀浆—→再加80%丙酮5ml，并转入离心管—→ 充分洗涤研钵—→ 离心—→ 定容至20 ml —→取上述提取液1ml，加80%丙酮4ml稀释后转入比色杯中，以80%丙酮为对照，测定光密度—→计算各种浓度（C a、C b）。

[注意事项]1 由于植物叶子中含有水分，故先用纯丙酮进行提取，以使色素提取液中丙酮的最终浓度近似80%。

2 由于叶绿素a、叶绿素b的吸收峰很陡，仪器波长稍有误差，就会使结果产生专门大的误差。

实验作业1 什么缘故提取色素时先用纯丙酮提取，再用80%丙酮提取？2 依照你的实验结果计算出该种植物的叶绿素a、b的比值。

3. 依照你的实验结果，计算出该植物每克鲜重叶片中叶绿素的含量（单位用mg·g-1FW表示）实验四赤霉素对水稻α-淀粉酶的诱导形成[实验目的]1．通过实验深切了解赤霉素在种子萌生进程中的调控作用。

2．把握测定α-淀粉酶活的一种简便方式[实验原理]淀粉性种子在萌动进程中，胚释放出来的赤霉素能诱导糊粉层细胞中α-淀粉酶基因的表达，引发α-淀粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解为糖。

外源赤霉素能代替胚的分泌作用，诱导α-淀粉酶的形成。

β-淀粉酶也能将淀粉水解成还原糖，但β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化。

将酶液在高温下维持一段时刻，钝化β-淀粉酶，可准确测定α-淀粉酶的活性。

[材料、仪器设备及试剂]1 实验材料：水稻种子2 实验仪器设备：1. 分光光度计；2. 恒温箱；3. 水浴锅；4. 移液管；5. 烧杯；6. 试管；7. 青霉素小瓶；8. 镊子；9. 刀片。

3 实验试剂：2mol/LNaOH溶液；1%淀粉溶液；20mg/L赤霉素溶液；L柠檬酸缓冲液；2，3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂[实验步骤]1.水稻种子的选择和预处置选取大小一致、健康的水稻种子，一份放入盛有适量的20mg/LGA溶液中，另一份放入盛有适量清水的培育皿中处置24h,掏出后用清水冲洗，置于培育箱中再陪养1d，处置与培育温度均为300C。

2.酶的提取取对照和GA3处置培育的种子2g→磨成匀浆→到入50ml容量瓶中→用蒸馏水定容至刻度→混匀→放置15-20min（每2min震荡一次）→离心（4000r/min,15min）3.α-淀粉酶活性的测定取试管4只→编号（清水实验；清水调零；GA3实验；GA3调零）→每管中各加入酶液1ml→700C恒温水浴加热12min→各加入1ml柠檬酸缓冲液→①将实验管置于400C恒温水浴15min→再迅速加入预热的淀粉溶液2ml→400C恒温水浴5min→加入NaOH溶液终止反映；②调零管中加入2mol/LNaOH溶液→混匀→加入预热的淀粉溶液2ml.4.样品的测定取以上各管中的溶液1ml于15ml刻度试管中→加入DNS试剂1ml→混匀→滚水煮沸5min→迅速冷却→定容至12ml→520nm波长测定OD值。

[结果计算]α-淀粉酶活性=（OD520×稀释倍数）/样品鲜重/反映时刻实验五植物呼吸强度的测定[实验目的]熟悉小篮子法测定萌生水稻种子呼吸强度的方式及其计算。

[实验原理]利用NaOH溶液滴定呼吸进程中释放的CO2，实验终止后，用草酸溶液滴定残留的NaOH，从空白和样品二者消耗草酸溶液之差，即可计算出呼吸进程中释放的CO2的量。

C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O2NaOH+CO2→Na2CO3+H2O2NaOH+C2H2O4(草酸) →Na2C2O4(草酸钠)+2H2O[材料、器材和试剂]1.实验仪器锥形瓶，秒表，酸式滴定管，移液管，尼龙网袋2个。

2.实验试剂1/44mol/L草酸溶液，0.2M NaOH溶液，1%酚酞。

3.实验材料萌生的水稻种子（48h）。