一、硫酸苯酚法测多糖含量
1、试剂配制
①浓硫酸：分析纯，95.5%
②80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。

6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。

（每次测定均需现配）
③5%苯酚：取苯酚100 g，加铝片0. 1 g和碳酸钠0. 05 g，常压蒸馏,收集182℃馏分。

称取
该馏分(100%苯酚)5 g，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，
冰箱中冷藏储存备用。

④标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。

准确称取20m g经105℃干
燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容。

2、制作标准曲线
准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8及0.9ml，各以蒸馏水补至1.0ml，然后加入6%（5%，9%）苯
酚0.5ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20min以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同
样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

1 2 3 4 5 6 7 8 0 标准葡萄糖溶液（mL）0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 蒸馏水（mL）0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 1.0 6%苯酚（mL）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸（mL） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
3 注意事项
（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。

（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。

（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算
（4）测定时根据光密度值确定取样的量。

光密度值最好在0.1——0.3之间。

比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml 的样品液测定。

（5）正常的反应溶液是深棕色。

糖越多颜色越深。

注意硫酸的纯度。

空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。

操作的时候有几条你需要注意的，这些对你的检测结果影响极大
1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。

2、样品检测的时候，向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀，加入硫酸基本操作：硫酸沿壁加，最好能旋转比色管，让硫酸能均匀的沿壁流下。

3、加完硫酸需要立即摇匀，前提是塞子要配套，不怕烫热、冷水浴，要准确。

二、考马斯亮蓝测蛋白含量
1 材料
1.1、设备：分光光度计（752、752N、UVmini-1240）、旋涡混合器（QL-901）、微量移液器（自备1000微升、200微升、10微升）
1.2、材料：试管、试管架、记号笔、枪头（10-1000微升）、5mL移液管、吸耳球、擦镜纸、滤纸、洗瓶、烧杯
1.3、试剂：、考马斯亮蓝试剂、标准蛋白质溶液？
2 标准曲线的制作
取9支试管，1支作空白，6支作标准曲线，2支留作测胰蛋白酶样品，分别标记为1-9号。

按照表1所示顺序加入各试剂，每加完一管，立即在旋涡混合器上混合均匀，第8、9管为胰蛋白酶样品的加样量。

表1 考马斯亮蓝法测蛋白质含量程序表
管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
标准蛋白(1.0mg/ml)/ml 0 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.05 0.1 蒸馏水/ml 0.1 0.09 0.08 0.06 0.04 0.02 0.0 0.05 0.0 考马斯亮蓝试剂/ml 5 5 5 5 5 5 5 5 5
2、加完各试剂2~5min后，即可开始用比色皿在752或752N分光光度计上测定各样品
在595nm处的光吸收值A595nm，空白对照为第1号试管。

3、以标准蛋白含量（mg）为横坐标，吸光度值A595nm为纵坐标，绘制标准曲线。

根据
测出的未知样品的A595值，计算蛋白质浓度。