学号:3506014009毕业设计（论文）题目：不同产地荷叶总生物碱的含量测定院（部）系药学院所学专业药学年级、班级完成人姓名指导教师姓名专业技术职称2010年 6 月 12 日论文原创性保证书我保证所提交的论文都是自己独立完成，如有抄袭、剽窃、雷同等现象，愿承担相应后果，接受学校的处理。
专业：药学班级：2006级药学本科二班签名：年月日目的荷叶中生物碱类化合物的生物活性较高，本实验通过对生物碱类成分几种不同提取方法的对比，确定最优提取方法。
用最优提取方法分别测定22种不同产地的荷叶粉末中生物碱类成分含量，为荷叶药材质量控制提供实验依据。
方法本实验用于荷叶中总生物碱类成分的提取方法主要有以下几种：酸水回流提取法、醇提回流提取法以及氨水-氯仿超声提取法。
其中，酸水提取法的工艺条件为：水提取量为荷叶量的35倍，提取温度为85℃，提取时间为2h，提取液PH为2~3；醇提法工艺条件为：醇提取量为荷叶的30倍分两次回流提取，提取温度为85℃，两次的提取时间共3.5h；氨水-氯仿超声提取法采用0.3g荷叶粉末，25ml氯仿和0.5ml氨水在常温下超声提取30min。
含量测定方法采用紫外可见分光光度法，以荷叶碱为对照，溴甲酚绿为显色剂，在415nm 波长下测定吸光度。
结果氨水-氯仿超声提取法提取最为完全。
用氨水-氯仿超声提取法分别对22种不同产地的荷叶粉末进行提取，用紫外分光光度法测得的吸光度各不相同。
结论不同产地的荷叶中生物碱类成分含量不同。
关键词：荷叶；生物碱类成分；提取方法；紫外分光光度法；含量测定Objective: The alkaloid in nelumbo nucifera is highly activated.Through this experiment ,we used several different ways extracting alkaloid,to determine the best extraction.The best extraction will be used to extract the alkaloid from different places,to determine the different content of alkaloid.Methods: There are three methods used to extract the alkaloid from nelumbo nucifera in this experiment:acid-water extraction ,alcohol extraction and ammonia-chloroform supersonic extraction.The progress of acid-water extraction is:water35 times as much as the mass of powder,85℃for 2h,pH2~3.Alcohol extraction:alcohol 30 times as much as the mass of powder,into two return to extract,85℃altogether for 3.5h.Ammonia-chloroform supersonic extraction:0.3g powder,25ml chloroform,0.5ml ammonia,ultrasound for 30 min at normal temperature.UV is used as the method of content determination,alkaloid for comparison,bromo cresol green for colour developing agent,determin the wavelength at 415 nm.Results: Ammonia-chloroform supersonic extraction is believed to be the best method.In this way ,we test all the nelumbo nucifera powder and get different absorbance.Conclusion: The alkaloid content in nelumbo nucifera from different habitats is of great difference.Key words: nelumbo nucifera ;alkaloid;extract;UV;content determination正文 (1)前言 (1)仪器与试剂 (1)实验方法与结果 (2)讨论 (8)结论 (9)参考文献 (10)文献综述 (11)致谢 (14)附录 (15)不同产地荷叶总生物碱的含量测定学生：李双娟指导教师：王福刚（泰山医学院药学院，泰安271016）1前言荷叶作为我国的传统中药在医学应用中历史悠久，据《本草纲目》记载，“荷叶服之，令人瘦劣”、“生发元气，裨助脾胃”等，而且荷叶在我国南北方均有种植，民间广泛用于食物及药物中。
近来人们加大对其活性化学成分和药理方面的研究，进一步明确其化学成分及药效之间的关系[1]。
这些研究成果将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据[2]。
荷叶化学成分复杂，含有生物碱、黄酮、精油、维生素C、鞣质、酒石酸、苹果酸、枸橼酸等，其中生物碱和黄酮类化合物的生物活性较高[3]因而近年来人们加大了对这两种化学成分的研究。
本课题主要展开荷叶中生物碱类成分的提取及含量测定。
因荷叶生物碱碱性较弱，不能直接溶于水，但能与酸作用生成盐溶于水，故荷叶生物碱可用偏酸性的水溶液提取[4]。
也可用醇类溶剂提取，再用氯仿萃取的方法得到[5,6]，还可以用氯仿及氨水在常温下超声提取[7]。
将由上述方法得到的提取液用紫外分光光度法在200~700nm范围内进行扫描，用荷叶碱作为对照，PH5的溴甲酚绿缓冲液显色，找到415nm 左右出峰较好的方法作为本实验的提取方法。
用最适宜的方法分别测定22种不同产地的荷叶中生物碱类成分的含量。
2仪器与试剂2.1仪器FA-1004型电子分析天平（上海精科天平）、S-54型紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）、KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）、FW-135型中药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）、旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅（北京市长风仪器）2.2材料和试剂2.2.1 材料荷叶粉末2.2.2 试剂邻苯二甲酸氢钾（天津市四通化工厂，分析纯，020928）、溴甲酚绿（天津市科密欧化学试剂开发中心，020426）、氨水（莱阳经济技术开发区精细化工厂，分析纯，071130）、氯仿（天津市富宇精细化工有限公司，分析纯，071014）、氢氧化钠（天津市凯通化学试剂有限公司，分析纯，090128）、盐酸（淄博化学试剂厂有限公司，分析纯，36%~38%，070402）、95%乙醇2.3溶液配制2.3.1 pH5.0溴甲酚绿溶液称取邻苯二甲酸氢钾5g，加水450mL，用0.2mol/L氢氧化钠调节pH为5.0，加入溴甲酚绿0.12 g，溶解，加适量氯仿预饱和，备用。
2.3.2 对照品溶液[8]称取荷叶碱对照品约4mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀。
精密量取1ml至10ml量瓶，加氯仿至刻度，作为对照品溶液。
3实验方法与结果3.1 酸水提取法3.1.1 荷叶生物碱提取液的制备[9]称取荷叶粉末1g放入圆底烧瓶中，加入35ml蒸馏水，用0.5%盐酸调节pH2~3，圆底烧瓶上接40cm冷凝管，85℃冷凝回流提取2h，提取结束后，提取液用滤纸过滤，用30ml 氯仿分两次萃取酸水液，弃去氯仿层。
酸水中加入0.5%氢氧化钠调节Ph7左右，静置，滤纸滤过，再加0.5%氢氧化钠调节pH9~11，再用60ml氯仿分2次萃取至水中无生物碱为止，合并氯仿液，在旋转蒸发仪中蒸干后，加入25ml氯仿，超声洗脱即得。
3.1.2 荷叶生物碱最大吸收波长的确定[10]取洗脱样1ml，加入5ml氯仿及1ml溴甲酚绿缓冲液于分液漏斗中，摇匀，静置，取4ml氯仿层于刻度试管中，加入无水乙醇1ml，摇匀，用紫外分光光度计在200~700nm波长范围内扫描，其最大吸收峰出现在275nm，如图1。
图1 酸水回流提取法3.1.3 由于此方法出峰不明显，差异太小，易有干扰，故此方法被排除。
3.2 醇提法3.2.1 荷叶生物碱提取液的制备[11]称取荷叶粉末5g，加95%乙醇80ml浸泡30min，85℃回流提取2h，过滤，滤渣用95%乙醇70ml回流提取1.5h，过滤，合并滤液，用旋转蒸发仪浓缩至20ml，即为荷叶生物碱粗提取液。
3.2.2 采用3.1.2中方法确定其最大吸收波长在412nm，A=0.477。
如图2。
图2醇提回流提取法3.3 氯仿及氨水超声提取法3.3.1 荷叶生物碱提取液的制备称取荷叶粉末0.3g置于50ml锥形瓶中，精密加入氨水0.5ml，氯仿25ml，常温下超声提取30min，放冷，滤过，滤渣用少量溶剂洗涤两次，合并溶剂，并定容至50ml量瓶中，备用。
3.3.2 荷叶碱最大吸收波长的确定取上述提取液1ml，蒸干，加入pH5.0溴甲酚绿缓冲液4ml，氯仿6ml，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗中，静置2h，分取氯仿层于200~800nm波长范围内扫描，测得吸收光谱在415nm处有最大吸收峰，A=0.483，如图3。
图3氨水超声提取法3.3.3同3.2.2结果比较，显然超声提取法提取比较完全，且峰比较强，故后续实验全部采用超声提取法。
对照品溶液及供试液在显色前后吸收光谱对比,如图4和5。
图4（a）对照品不显色图4(b)对照品显色图5（a）氨水超声提取不显色图5(b)氨水超声提取显色3.4 超声提取法测定总生物碱的方法学考察3.4.1 精密度考察取荷叶粉末0.3g(0.3009g)，按3.3.1方法获得提取液，取1ml提取液，蒸干，加入4mlpH5.0溴甲酚绿缓冲液，6ml氯仿，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗中，静置2h，分取氯仿层，在415nm波长处测定其吸光度，结果见表1，RSD%=0.533。
表1 精密度考察编号 A 平均值RSD（%）1 2 3 4 5 6 0.4340.4330.4360.4380.4370.4390.436 0.5333.4.2 线性关系考察精密吸取荷叶碱对照品溶液(浓度为0.0410mg/ml) 0,0.3,0.6,0.9,1.2,1.5和1.8ml，蒸干，分别加入pH5.0溴甲酚绿缓冲液4ml，氯仿6ml，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗中静置2h，分取氯仿层于415nm波长处测定吸光度。