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上均为国产分析试剂 ) 。石斛碱对照品自制 [ 4] , 面 积归一法检测含量达 99% 。 1 2 供试药材
2008年 11月至 2009月 2 月, 采集浙江省铁皮 石斛人工栽培基地 11 个种质一至三年生 ( 铁皮石 斛萌蘖生理年龄 ) 样品 33个, 云南省铁皮石斛人工 栽培基地 6 个种 质一年 生 ( 铁皮 石斛萌 蘖生 理年 龄 ) 样品 6个、齿瓣石斛 D devoninum 样品 2个, 其 中铁皮石斛样品采集地产量占全国 90% 以 上。购 买杭州胡庆余堂、杭州青 藏奇珍铁皮枫斗 ( 药材基 原为铁皮石斛 ) 样品 2个, 杭州吴山广场、杭州胡庆 余堂、杭州青藏奇珍等枫 斗 ( 药材 基原为非铁皮石 斛 ) 样品 9个。浙江省人工栽培基地铁皮石斛药材 样品详见文献 [ 5]。 1 3 铁皮石斛总生物碱含量的测定 1 3 1 样品处理 样品在 60 烘箱中烘干, 粉碎, 过 60目筛。取各种样品粗粉 0 1 g, 用适量的氨水 润湿密塞 30 m in, 精密加入氯仿 10 mL 称重, 水浴加 热回流 2 h, 冷却后, 氯仿补足失重, 过滤, 以酸性染 料比色法测定含量 [ 6] , 试验平行 3次。部分样品氯 仿稀释后再进行测定。
10 0 mL, 加入 pH 4 5缓冲液 5 0 mL 和 0 04% 溴 甲酚绿溶液 1 0 mL, 剧烈振摇 3 m in, 静置 30 m in, 氯仿层经氯仿浸泡处理并干燥后的药棉滤过, 取续 滤液 5 0 mL 加 0 01 m o l L- 1氢氧化钠无水乙醇液 1 0 mL 摇匀, 以氯仿 10 0 mL 为空白, 同法操作, 于 波长 620 nm 处测得吸收度。吸光度与浓度的回归 方程 为 C = 9 542 9A - 0 038, r = 0 999 8。在 0 01~ 0 05 m g, 浓度 ( C )与吸光度 (A ) 具有良好的 线性关系。
元 /g
药材 基原
总生物碱 /%
S1 杭州吴山广场 0. 4 枫斗
非铁皮石斛 0. 060 0
S2 杭州吴山广场 1. 2 枫斗
非铁皮石斛 0. 027 5
S3 杭州吴山广场 2. 2 枫斗
非铁皮石斛 0. 087 5
S4 杭州吴山广场 4. 0 枫斗
非铁皮石斛 0. 022 5
S5 杭州吴山广场 5. 0 枫斗
0. 033 7
12
0. 036 0
0. 039 0
0. 042 5
0. 039 2
13
0. 033 0
0. 028 5
0. 020 5
0. 027 3
表 2 云南省人工栽培石斛总生物碱质量分数
种质
14 15 16 17 18 19 20 21
产地
德宏 德宏 景洪 德康 景洪 勐海 德宏 德宏
药材基原
0 027 5% ~ 0 043 0% , 市场购买铁皮枫斗 (药材基 原为铁皮石斛, 年龄未知 ) 为 0 032 5% , 0 039 0% , 齿瓣石斛总生物碱为 0 023 0% , 0 024 5% , 其他枫 斗 ( 非 铁皮 石斛 ) 样 品总 生物 碱 为 0 022 50% ~ 0 087 5% 。目前, 浙江铁皮石斛骨干基地一般都在 二至三年生采收, 云南铁皮石斛骨干基地一般都在 一年生采收, 根据上述结果可以基本确定总生物碱 明显偏离 0 019 0% ~ 0 043 0% 的样品为非铁皮石
浙江人工栽培不同种质铁皮石斛总生物碱含量
见表 1, 云南省人工栽培铁皮石斛、齿瓣石斛和市售 枫斗药材总生物碱含量见表 2, 3, 供试铁皮石斛其 生物碱质量分数为 0 019 0% ~ 0 043 0% , 其中浙 江人工栽培骨干基地生产的铁皮石斛一至三年生药 材总生物碱质量分数为 0 019 0% ~ 0 042 5% , 云 南一年 生 铁 皮 石斛 总 生 物 碱 质 量 分 数为
非铁皮石斛 0. 031 5
S10 青藏奇珍
66. 0 铁皮枫斗 铁皮石斛 0. 039 0
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第 35卷第 18 期 2010年 9 月
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2 2 种质、年龄、产地与铁皮石斛总生物碱含量的 关系
表 1 同时可见, 产地环境差异不大的浙江人工 栽培铁皮石斛, 不同种质总生物碱含量均存在极显 著的差异。 11个种质一至三年药材平均总生物碱 质量分数 1号种质最低, 为 0 022 5% , 12号种质最 高, 达到 0 039 2% , 两者相差 0 016 7% 。其中 1 ~ 6号种质药材样品采自同一产地, 栽培环境、栽培基 质与基地管理完全一致, 不同种质间总生物碱含量 同样存在极显著差异, 一至三年生样品平均值变幅 为 0 022 5% ~ 0 030 5% 。因此, 人工栽培铁皮石 斛其总生物碱含量的差异主要来自遗传差异。
1 3 2 线性试验 精密称取石斛碱 1 00 m g置 100 mL 量瓶中加氯仿至刻度。精密量取 1 0, 2 0, 3 0, 4 0, 5 0 mL 分别置分液漏斗中, 用氯仿准确稀释至
第 35卷第 18 期 2010年 9 月
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非铁皮石斛 0. 032 5
S6 杭州吴山广场 8. 0 枫斗
非铁皮石斛 0. 025 0
S6 杭州胡庆余堂 4. 0 枫斗
非铁皮石斛 0. 023 5
S7 杭州胡庆余堂 10. 0 枫斗
非铁皮石斛 0. 035 0
S8 杭州胡庆余堂 20. 0 铁皮枫斗 铁皮石斛 0. 032 5
S9 青藏奇珍
15. 0 枫斗
斛, 但总生物碱含量在此范围的样品也可能不是铁 皮石斛。因此, 总生物碱含量是鉴别铁皮石斛药材真 伪与优劣的一个重要指标, 但尚不能根据总生物碱单 一指标辨别铁皮石斛药材真伪与优劣, 必须结合多糖 含量与其他活性化学组分才能真正辨别铁皮石斛药 材的真伪与优劣。
表 1 浙江人工栽培铁皮石斛总生物 碱质量分数 %
第 35卷第 18 期 2010年 9 月
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铁皮石斛总生物碱含量变异规律
诸燕1, 张爱莲 1, 何伯伟2, 张新凤 1, 俞巧仙3, 斯金平 1*
( 1 浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室培育基地 天然药物研发中心, 浙江 临安 311300; 2 浙江省中药材产业协会, 浙江 杭州 310020; 3 浙江森宇药业有限公司, 浙江 义乌 322000)
种质
一年生
二年生
三年生
平均值
1
0. 020 5
0. 021 0
0. 026 0
0. 022 5
2
0. 022 5
0. 026 5
0. 037 5
0. 028 8
3
0. 024 0
0. 032 0
0. 035 5
0. 030 5
5
0. 024 0
0. 027 5
0. 035 5
0. 029 0
6
0. 026 5
[ 摘要 ] 目的: 全面了解不同种质、不同采收年限铁皮石斛 药材总生 物碱含 量及其变 异规律, 为 铁皮石斛 真伪鉴 别与优 质药材培育提供依据。方法: 采集铁皮石斛人工栽培骨干基地一至三年 生铁皮石 斛 17个 种质 41 个样品, 以及市售 不同价位 枫斗药材 11个样品; 采用酸性染料比色法测定总生物碱含 量。结果 : 人工栽培的铁皮石斛与市场购买的铁皮枫斗药材总 生物 碱在 0 019 0% ~ 0 043 0% ; 浙江省 11个铁皮石斛 种质一 年生、二年 生、三年生 样品 平均 总生物 碱为 0 025 3% , 0 027 0% , 0 032 6% , 云南产一年生铁皮石斛平均总生物碱为 0 034 3% 。结论: 不同种 质、年龄的铁 皮石斛 总生物 碱含量 差异很 大, 并 且总生物碱含量随着 生长年限的增加而增加, 云南产铁皮石斛总生物碱明 显高于浙江 产铁皮石斛 , 但正 宗的铁皮石 斛总生物 碱含量具有明显限量 范围, 总生物碱含量明显偏离限量范围的样品可以基 本确定为非 铁皮石斛, 总生物 碱含量在此 范围的样 品必须结合多糖含量 与其他活性化学组分才能真正辨别铁皮石斛药材的真伪与优劣。
1 3 3 稳定性试验 精取某一样品溶液 10 m L, 另 以氯仿 10 0 mL 为空白, 按 线性试验 项上操作, 分别在 0, 10, 20, 30, 40 m in测定吸光度。结果显示 该显色在 20 m in内稳定。 1 3 4 精密度试验 精取 0 001 g L- 1的石斛碱 溶液 10 m L, 另以氯仿 10 0 mL 为空白, 其余操作同 上, 测定 5次。结果显示, RSD 1 7% 。 1 3 5 重复性试验 取同一样品 5份, 按照样品中 总生物碱提取步骤提取样品溶液, 精取样品溶液 10 mL, 另以氯仿 10 0 mL 为空白, 其余操作同上, 测定 吸光度。结果显示, RSD 4 7% 。 1 3 6 加样回收率试验 取某一已知含量样品 5 份, 精密加入石斛碱对照品溶液, 按照样品中石斛碱 提取步骤提取样品溶液, 精取样品溶液 10 0 m L, 另 以氯仿 10 0 mL 为空白, 其余操作同上, 测定吸光 度。平均回收率 101% , RSD 4 9% 。 2 结果与分析 2 1 铁皮石斛总生物碱含量
铁皮石斛 铁皮石斛 铁皮石斛 铁皮石斛 铁皮石斛 铁皮石斛 齿瓣石斛 齿瓣石斛
总生物碱 /%
0. 028 0 0. 043 0 0. 035 0 0. 040 0 0. 027 5 0. 032 0 0. 023 0 0. 024 5
表 3 市售枫斗药材总生物碱质 量分数
样品号 购买点
单价 / 商品名
0. 025 0