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按所吸收光的波长区域不同，分为 紫外分光光度法和可见分光光度法，合称 为紫外-可见分光光度法。
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基本原理----朗伯-比尔定律 一、吸光度和透光度
设入射光强度为I0，吸收光强度为Ia,透 射光强度为 It，反射光强度为Ir，则
I0= Ia+ It+ Ir 由于反射光强度很弱，其影响很小，上式 可简化为：
I0= Ia+ It
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吸光度: 为透光度倒数的对数，用A表示， 即A=lg1/T=lgI0/It
透光度：透光度为透过光的强度It与入射光 强度I0之比，用T表示：
即 T= It/I0
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• 二、朗伯-比尔定律
•
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过 含 有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光 度与 吸光物质浓度、液层厚度乘积成正 比，即
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紫外-可见分光光度法
紫外的发展史
仪器的原理
仪器组成
固体紫外与液体紫外的区别
紫外应用实例
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固体紫外实例--60nm的金颗粒负载在聚合物中
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液体紫外应用实例--40nmAuNPs的uv数据
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液体紫外应用实例--40nmAuNPs的uv数据
6、美国Beckman公司于1945年，推出世界上第一台成熟的紫外 可见分光光度计商品仪器
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紫外-可见分光光度法
紫外的发展史
仪器的原理
仪器组成
固体紫外与液体紫外的区别
紫外应用实例
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基本原理
它是利用物质的分子或离子对某一 波长范围的光的吸收作用，对物质进行定 性分析、定量分析及结构分析, 所依据的 光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长 的光而产生的吸收光谱。
（55nm ,534.2nm）
528.2nm波长对应金颗粒的粒径为40nm左右 [2]
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不同粒径的金颗粒
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பைடு நூலகம் 参考文献
[1] 王高明，郭城，张亮亮等.积分球光能均匀性的Monte Carlo模拟[J].微光与红外， 2009,39(1)：67-69. [2] Y. Feng, J. He, H. Wang, Y. Y. Tay, H. Sun, L. Zhu and H. Chen, J. Am. Chem. Soc., 2012, 134, 2004–2007.
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固体紫外与液体紫外区别---仪器构成
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积分球的原理：
积分球是紫外可见分光光度计最为重要的附属装置，由于积分球的使用，大大扩 展了光度计可以测定的样品形态和种类，比如悬浊样品和不透明类样品。分析测 试中心的紫外-可见分光光度计（U-3310）配置的积分球装置如图所示：
4、1859年本生(R．Bunsen)和基尔霍夫(G．Kirchhoff)发现由食 盐发出的黄色谱线的波长和“夫琅和费线，；中的D线波长完全 一致，才知一种物质所发射的光波长（或频率），与它所能吸 收的波长（或频率）是一致的。
5、1862年密勒( Miller)应用石英摄谱仪测定了一百多种物质的 紫外吸收光谱。他把光谱图表从可见区扩展到了紫外区，并指出： 吸收光谱不仅与组成物质的基团质有关。
液体紫外固体紫外原理及实例
紫外-可见分光光度法
紫外的发展史
仪器的原理
仪器组成
固体紫外与液体紫外的区别
紫外应用实例
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发展简史
1、早在1665年，牛顿首次通过分光光度法发现太阳光是复合 光的事实。
2、1815年夫琅和费(J. Fraunhofer)仔细观察了太阳光谱， 发现太阳光谱中有600多条暗线，并且对主要的8条暗线标以A、 B、C、D…H的符号。这就是人们最早知道的吸收光谱线，被 称为“夫琅和费线”。
0.575
光源
单色器
检测器
显示
吸收池
单色器：将光源发射的复合光分解成连续光谱并可从中选出任一波长单色 光的光学系统。 检测器：利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号。 11
吸收池
吸收池：又叫比色皿，用于盛放待测溶液和决定透光液层 厚度的器件。
主要有石英吸收池和玻璃吸 收池两种。 在紫外区须采用石英吸收池， 可见区一般用吸收玻璃池。 主要规格0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm和5.0cm
注意事项：手执两侧的毛面，盛放液体高度四分之三。
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紫外-可见分光光度法
紫外的发展史
仪器的原理
仪器组成
固体紫外与液体紫外的区别
紫外应用实例
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固体紫外与液体紫外区别
仪器组成 测量参数 所测样品
液体紫外 无积分球 吸光度
固体紫外 有积分球
漫反射
液体样品
悬浊样品和不透明类 样品
3、朗伯( Lambert)早在1760年就发现物质对光的吸收与 物质的厚度成正比，后被人们称之为朗伯定律；比耳 ( Beer)在1852年又发现物质对光的吸收与物质浓度成正 比，后被人们称之为比耳定律。在应用中，人们把朗伯定 律和比耳定律联合起来，又称之为朗伯—比耳定律。
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发展简史
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A= κ cl
式中比例常数κ与吸光物质的本性，入射 光
波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓 度，
l为透光液层厚度。
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紫外-可见分光光度法
紫外的发展史
仪器的原理
仪器组成
固体紫外与液体紫外的区别
紫外应用实例
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基本组成--单光束分光光度计
光源：提供符合要求的入射光。 要求：在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱， 具有足够的辐射强 度、较好的稳定性、较长的使用寿命。
光线由输入孔入射后，光线在此球内部被均匀的反射及漫射，因此输出孔所得到 的光线为相当均匀之漫射光束。 而且入射光之入射角度、空间分布、及极化皆不 会对输出之光束强度及均匀度造成影响[1]。
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积分球的基本工作原理
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固体紫外与液体紫外区别---积分球
双光束积分球式分光光度测试仪有两个光栅和两个检测器。测量时光源只闪一次，同 样测样品和参比白。这样就克服了系统变化所带来的误差，测量数据的精度非常高。