本项目针对松茸多糖 TMP-A 单体的免疫活性尚无报道的研
作品撰写 基本思路
究现状，以松茸多糖 TMP-A 单体为对象，运用动物学实验技
的目的和 术、细胞生物学实验技术、酶联免疫和蛋白印迹技术，探寻
松茸多糖 TMP-A 单体的免疫活性，为真菌多糖的研究开发提 供相关科学依据。
松茸多糖 TMP-A
肝细胞、脾细胞和巨噬细胞（细胞 株和荷瘤鼠原代细胞）
Lentinus
edodes.J.Microbio.Biotechnol.2009, 19(6):634-638.
[8]Hong Fu, Wen-yuan Guo, Hao Yin, Zheng-xin Wang and Rui-dong Li.Inhibition of
Lentinus
liver of the
5）一抗孵育： 封闭结束后，用 TBS-T 稀释第一抗体， 将 NC 滤膜置于其中，4 ℃ 震荡过夜。 6）显迹：TBS-T 液漂洗 NC 膜 3 次 / 10 min，将膜与 TBS-T 稀释二抗孵育， 室温下振荡 1 h； TBS-T 漂洗 NC 膜 3 次 / 10min；TBS 液漂 NC 膜 3 次 / 10 min，X光胶片上 曝光，随后显影、定影，用图像分析系统测定蛋白条带的光密 度，进行定量分析。 参考文献： [1]Matsunaga K, Hosokawa A, Oohara M, Sugita M, Harada M, Nomoto K.Direct action of a protein-bound polysaccharide, PSK, on transforming growth factor- . Immunopharmacology.1998, 40:219-230 [2] Pauline M R, et al.Glycosylation and the immune system. Science, 2001, 291: 2370-2376 [3] Guentas, L., Pheulpin, P., Michaud, P., Heyraud, A., Gey, C., Courtois, B..Structure of a polysaccharide from a Rhizobium species containing acid.Carbohydrate
活剂， 体内外均能增强正常或免疫功能低下小鼠的迟发型超敏 反应(DTH)、促进细胞毒 T 淋巴细胞(CTL)的产生、提高 CTL 的杀伤活力、 提高抗体依赖性细胞毒细胞 (ADDC)活性[7， 8]。 Jkekawa T 等（1992）研究表明姬松茸多糖具有明显的体外 细胞免疫调节作用和显著抑制肿瘤细胞增殖作用 [9] 。 Kim Gi-Young，et al（2001）从姬松茸中分离纯化出一个水溶性 蛋白多糖能提高 CD80 和 CD86 的表达， 通过增强免疫力来控 制肿瘤和免疫缺陷性疾病[10]。但是，目前关于大型食、药用 真菌多糖的免疫活性分子生物学机制还没有统一的定论， 其抗 肿瘤活性可能是通过增强机体自身免疫细胞活性来实现， 也可 能通过提高巨噬细胞的吞噬能力， 发挥直接的细胞毒作用从而 起到抑制肿瘤生长，甚至直接杀死肿瘤细胞，因此真菌多糖及 其复合物的研究引起越来越多的关注，已成为分子生物学、医 药学、食品科学等领域的研究热点之一[11]。
marmoreus.I.anti-tumor
Polysaccharides[J].
activity
作品在何 时、何地何 种机构举行 的会议上或 报刊上发表 及所获奖励
鉴定结果
(1) ELISA 法检测细胞因子的分泌情况 按 每 孔 2 × 105 个 细 胞 接 种 于 24 孔 板 中 ， 含 有 160 nmol/L PMA 的培养液培养 72 小时后，PBS洗三遍，各组 加入处理因素，继续培养 24 小时。收集细胞培养上清液。从 平衡至室温的密封袋中取出实验所需板条，留空白孔。加 0.1
edodes
tumour physical
polysaccharides growth.International
against journal
sciences.2011, 6(1):116-120. [9] Jkekawa T，Saitoh H.Anti-tumor activity of Hypsizigus
2-deoxy-b-D-arabino-hexuronic Research.2001, 332:167-173
[4]Nair P.K.R., Rodriguez S., Ramachandran R., Alamo
A., Melnick S.J.et al.Immune stimulating properties of a novel polysaccharide from the medicinal plant Tinospora cordifolia Int.Immunopharmacology.2004, 4:1645-1659 [5]Ikekawa T. Beneficial effects of edible and medicinal mushrooms on health care. International Journal of Medicinal Mushrooms.2001, 3:291-298. [6]Wasser S.P., Didukh M.Y., Amazonas MALA, Nevo E., Stamets P, Eira AF. Is a widely indeed
cultivatedculinary-medicinal
mushroom
Agaricus blazei Murrill. International Journal of
Medicinal Mushrooms.2002, 4:267-290. [7]Lee H.H., Lee J.S., Cho J.Y., Kim Y.E., Hong E.K..Structural characteristics of immunostimulating polysaccharide from
学 术 论 文 文 摘
且是多种内源性生物活性分子的重要组成成分。 近代生物化学 一直把多糖视作生物体内维持细胞组织结构 (如纤维素和几 丁质 )和提供能量来源 (如淀粉和糖元 )的物质，没有给予足 够的重视，多糖的发展较蛋白质、核酸晚得多，加上多糖本身 的复杂性，目前研究水平要大大落后于蛋白质和核酸的研究 [1，2]。 近 20 年来，已有大量关于多糖生物活性的研究报道，主 要集中在免疫调节、 抗肿瘤、 抗病毒、 抗氧化和降血糖等方面， 其作用是多途径、多环节、多靶点的，大量免疫实验证明食用 菌多糖不仅能激活 T 淋巴细胞、B 淋巴细胞、自然杀伤细胞 （NK）等免疫细胞，还能活化补体，促进细胞因子的生成， 对免疫系统发挥多方面的调节作用 [3 ， 4] 。 Ikekawa, et al （2001）考察了生产药用真菌的农场，发现这类农场人员的 癌症发病率明显低于其他单位的人员[5]， 通过老鼠模型的动物 实验发现，真菌多糖具有显著的抗癌作用。 Wasser ， et al （2002）研究发现，真菌多糖不是直接杀死癌细胞而是提高 免疫力，对身体没有伤害，不会给身体造成额外的负担[6]。香 菇多糖的免疫调节活性研究地较为透彻， 它是典型的 T 细胞激
BALB/c 小鼠 S180 实体瘤的效应 分析
细胞生物学免疫效应 分析
免疫印迹和 Elisa 分析 免疫因子效应
揭示松茸多糖 TMP-A 的免疫活性及其相关分 子机制
1. 独 特 的 实 验 材 料 ： 本 项 目 的 研 究 材 料 食 药 用 真 菌 松 茸 （Tricholoma matsutake ） ，其生境独特，且与松属、云杉 属等形成外生菌根关系，不能人工栽培的纯天然的野生食 用菌，该材料稀有价值高。 2.研究对象新：本项目研究对象松茸纯多糖 TMP-A 结晶单 体，是已经过分离纯化 ,并对其结构进行了解析的多糖，通 过 SCIFinder Scholar 查新，该多糖为一新型多糖，该成果 已得到国际同行专家的认可。
请提供对于 理解、 审查、
ml 离心后的细胞培养上清液于反应孔中，置 37℃ 孵育 90
评价所申报 分钟。然后洗板 5 次 (同时做空白孔，标准品空)。于各反应 作品具有参 考价值的现 孔中，加入新鲜稀释的生物素化抗体工作液 0.1 ml，37℃ 孵 有技术及技 术文献的检 育 1 小时，洗板 5 次。加酶结合工作液 0.1 ml，37℃ 避光 索目录
作品的科学 性、先进性 及独特之处
3.研究内容新：在前期研究中初步证实该新型多糖 TMP-A 具有显著的免疫活性，且呈一定的剂量依赖关系，本项目 拟通过体内体外实验，进一步研究其免疫活性。
真菌多糖多具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒和免疫调节等生 物学活性，但由于多糖分离纯化困难及其结构复杂，能够得 到单体、阐明其结构、具有免疫调节活性且分子机制明确的
孵育 分钟， 洗板 5 次。 加入 0.1 ml 显色底物液， 37℃ 避 光孵育 15 分钟：于各反应孔中加入终止液 0.1 ml，混匀后 即可测量OD450值。 (2) Western Blot 检测蛋白表达变化 1）总蛋白的提取：收集细胞，加入冰预冷的蛋白裂解液 （l mmol / L PMSF，pH 7.4)，混匀，超声破碎细胞；4 ℃，
作品的实 多糖匮乏。本研究拟获得的松茸多糖单体 TMP-A 为研究对 际应用价值 和现实意义 象，运用细胞生物学技术研究 TMP-A 对肝细胞和脾细胞的增
殖效应以及对巨噬细胞的吞噬效应的影响，结合荷瘤 S180 小 鼠免疫实验，研究 TMP-A 的免疫活性，为真菌多糖的研究开 发提供相关科学依据。
真菌多糖(polysaccharides)又称多聚糖，是生物有机体普 遍存在的一类生物大分子，不仅参与组织细胞骨架的构成，而
B1．申报作品情况（自然科学类学术论文）