植物在盐胁迫下，活性氧含量会明显增加，对植物体产 生毒害，而过氧化物酶（POD）会清除植物体内多余的活 性氧 。过氧化物酶广泛存在于植物的各个组织器官中。在 有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶可以使愈创木酚氧 化，产生茶褐色物质，在470nm处有最大吸收峰，可根据 单位时间内A470的变化值，计算POD活性。
（五）丙二醛含量测定 1、丙二醛提取 小麦叶片0.2g，加入10﹪三氯乙酸(TCA)5mL(分两次加)和少 量石英砂充分研磨，匀浆液以4000r/min离心20min，上清液 即为样品提取液。 2、反应体系 取2mL提取液，分别加入2mL 0.6﹪TBA液，混匀，在试管上 加盖塞，置于沸水浴中沸煮15min，迅速冷却，离心。取上清 液测定532nm和450nm下的A值。以2mL水代替提取液调零。 3、MDA含量计算： 根据C＝6.45×A532－0.56×A450，计算出样品提取液中丙二醛 的浓度C，然后再计算出每克样品中丙二醛的含量(μmol/g （FW)）。
植物在盐胁迫下，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛 （MDA）是其产物之一，通常将其作为脂质过氧化指标， 用于表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强 弱。丙二醛是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条 件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三 甲川（3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮），其最大吸收波长在 532nm。
实验九 植物耐盐生理指标测定（综合性）
一、实验目的： 1、了解盐胁迫的机理以及植物的耐盐机制 2、了解植物盐处理的方法 3、掌握植物体内脯氨酸含量测定的原理和方法 4、掌握过氧化物酶活性的测定原理和方法 5、掌握丙二醛含量的测定方法 6、掌握基本的数据统计方法
二、定量的脯氨酸 （Pro）降低水势, 维持植物体内的水分平衡, 保证植物 的正常生长。用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游 离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后， 溶液即成红色，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在 520nm波长下比色，从标准曲线上查出脯氨酸的含量。
4. 脯氨酸的含量的计算 从标准曲线查得脯氨酸浓度，计算出样品中脯氨酸的含量， 以每克材料鲜重含脯氨酸的微克数表示（μg/g）。
（四）过氧化物酶活性的测定 1、过氧化物酶的提取 称取小麦叶片0.2g，加5ml pH 6.0的磷酸缓冲液，再加入少许 PVP及石英砂研磨。4℃，4000rpm离心15分钟，上清液为酶 粗提取液 2、反应体系 50μl酶粗提取液加入4ml反应液，在可见分光光度计下 470nm处测A值，放入后立即记时，每隔20s记一次数值，连 续记录三次，取平均值。 3、酶活力定义 过氧化物酶活性以每克鲜重每分钟在470nm下A值的变化值， 设每变化0.01为一个酶活力单位。POD活性=U/min· g
（三）脯氨酸含量测定 1、标准曲线的制作 用100μg/ml脯氨酸配制成0.4、0.8、1.2、1.6、2.0μg/ml的 标准溶液。取标准溶液各2ml,加2ml3% 磺基水杨酸，2ml 冰醋酸和4ml2.5% 茚三酮试剂于具塞试管中，置沸水浴中 显色1h，冷却后与波长520nm测定A值，以A值为纵坐标， 脯氨酸浓度（μg/ml）为横坐标绘制标准曲线。
五、思考问题 1.为什么设置重复处理？ 2.分光光度法要求A值在多大范围内，数据才可靠，如何调 整？ 六、实验报告 主要内容包括：1.实验目的及要求 2.实验主要仪器和试剂 3. 实验原理 4.实验步骤 5.实验结果 6.结果分析 7.回答问题
2 、脯氨酸的提取 称取小麦叶片0.2g，加3%磺基水杨酸5ml研磨提取，匀浆 移至试管中，在沸水浴中提取10min，冷却后，5000rpm离 心20min，上清液即为脯氨酸粗提液。 3、反应体系 取上清液2ml，并加入1ml冰醋酸，2ml酸性茚三酮，混匀 置于沸水浴中显色0.5h。以2ml磺基水杨酸，1ml冰醋酸， 2ml酸性茚三酮为对照。在可见分光光度计下520nm处测得 A值。
三、实验主要仪器和试剂
仪器: 离心机；分光光度计；恒温水浴锅 试剂：酸性茚三酮溶液；冰醋酸；标准脯氨酸溶液；3％ 磺基水杨酸；过氧化物酶测定反应液；pH6.0磷酸缓冲液 10％TCA；0.6％TBA
四、实验步骤 （一）实验材料的培养 小麦种子吸胀8h后消毒，采用水培法种植，至三叶期， 作为供试材料。 （二）盐胁迫处理 用200 mmol/L NaCl对小麦进行盐胁迫，以未进行盐胁迫 为对照，以进行盐胁迫为处理，盐胁迫3d后分别测定脯 氨酸含量、过氧化物酶活性和丙二醛含量，对照和处理 分别重复3次。