01.0 目的
01.1 阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对
产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。

02.0 适用范围
02.1 适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。

03.0 人员职责
测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。

04.0 内容
04.1 术语和定义
下列术语和定义适用于本规程。

04.1.1 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用
个数来表示。

04.1.2 沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门
的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。

04.1.3 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/
皿表示。

04.2 测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于
培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培
养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

04.3 监测周期：A级洁每次室验做监控， B 级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一
次监控。

04.4 测试方法：
04.4.1 使用设备与材料
高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。

恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。

培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。

培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35 ℃
恒温培养箱中培养72 小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好
的培养基平皿应放在2- 8℃的环境中存放。

清洁剂：75%酒精
04.4.2 测试时间：
（1）对单向流，如 A 级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不
少于10 分钟后开始。

（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。

（3）培养皿的采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；
动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4小时。

04.4.3采样点数及其布置
（1）最少采样点数目：
洁净度级别
2
面积(M)（m
）
A级B级C级D级M﹤102～322 2 10≦M﹤20422 2
20≦M﹤40822 2 40≦M﹤1001642 2
注：表中的面积，对于单向流洁净室（区）、洁净工作台，指的是送风面积，对非单向流洁净室（区），指的是房间面积。

（2）最少培养皿数
洁净度等级所需φ90mm培养皿数（以沉降4h计）A级14
B级 2
C级 2
D级 2
（3）采样点布置
洁净室（区）采样点布置宜力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏。

下列多点采样的采
样点布置图示可作参考（见图1）
图1平面采样点布置图
A级单向流区域，洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气流的工作面
上，气流形式可参考图2、图3。

图2水平单向流的气流形式
图3垂直单向流气流形式
①工作区采样点的位置离地0.8m-1.5m左右（略高于工作台面）。

②取样时，应尽量避免在回风口附近取样（距离1m以上），且测试人员应在取样的下风测，
并尽量少走动。

可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。

取样时，取样设备会对
流产生干扰，取样时应避免可能对气流组织的干扰。

04.4.4测试步骤：
04.4.4.1采样方法
用无菌容器将预先培养的培养基（无菌平皿）放至传递窗，紫外灯照0.5小时，
待检测用，将培养皿取出，用75%酒精擦平皿表面，放置在预先确定的取样点，
打开培养皿盖，使培养基表面暴露时间不少于30min，现将培养皿盖，盖后倒
置培养。

检测时记下培养皿打开的起始时间和结束时间。

04.4.4.2 培养：
全部采样
结束
后
，
将
培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

30℃-35 ℃培养，为 72 小时。

每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可定 3 个培养皿 做对照培养。

04.4.4.3 菌落计数 用肉眼直接计数，然后用 5-10 倍放大镜检查，是否有遗漏。

若培养皿上有 2
个或 2 个以上的菌落重叠，可分辨时仍以 2 个或 2 个以上计数。

04.4.5 注意事项 0
4.51 测试用具要做灭菌处理以确保测试的。

4.
4
.5
.2 采取一切措施防止人为对样本的污染对培养基参 0
4..53
由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般有透射光于培
养
面仔细
观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌要微镜别。

04
4.5.4
采样前应仔细检
查
每个培养皿的质量
，如或污染
04.4.5.5 测试状态 沉降菌测试前，温度在 18℃- 26℃，相对湿度在 45%-65%，洁净
洁净区
和洁净区与洁净10Pa 。

04.3.5.6 测试人员 测试状态有静态和动态两种，并在报告测试状态。

静态测试内 测试人员不多于 2 人。

被测试洁净区已消毒，测试 净度级别 04.4 结果计算 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

平均菌落数的计算见下式： 计算公式： 式中 M 为平均菌落数（ CFU ） Mi 表示 1，2，3，⋯ ⋯ n 号皿菌落数； n 表示平皿总数。

04.5 标准 洁净度级别 沉降菌平均菌落数（ CFU/皿）以 4 小时计 1
B级 5
C级50
D级100
04.6 结果评定
04.6.1 每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定评定标准中的界限。

04.6.2 在静态测试时，若某测点的沉降菌落数超过评定标准，则重新测试两次，
两次测试结果均合格才能判为合格。

05.0 附件
05.1 REC：JY-001-01 《沉降菌检验原始记录》
06.0 参考文献
《药品生产质量管理规范》2010 年版
《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》GB/T16294-2010
07.0 变更记载
版本号实施日期变更描述
01 新建立
（专业素材和资料部分来自网络，供参考。

可复制、编制，期待您的好评与关
注）。