High Fat 0.3% Cholesterol T-Chol 1500-1800 mg/dl Atherosclerotic Lesion
Normal Chow T-Chol 500-700 mg/dl 0 6 12 18 wks of age
抗动脉硬化中药的药理学研究(一)
◎ 血脂的测定 ◎ 病理形态学研究 制作主动脉弓病理切片 染色及斑块面积的测定，测定斑块面积用 imagepro plus软件 ◎ 分子病理学研究 通过免疫组织化学，用特定的抗体检测斑 块组织中相关分子的表达
抗动脉硬化中药的药理学研究(二)
◎ 分子生物学研究 巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)及其受体cfms的基因表达 血小板来源的生长因子(PDGF)受体的基因 表达 凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)的 基因表达 趋化因子(cxcl16、MCP-1及其受体CCR2等)
● 血管再狭窄的研究
动物模型
降脂中药的药理学研究(二)
◎ 载脂蛋白含量的测定 apoAI apoB apoC ◎ LDLR活性测定 放射性配基法 酶联免疫吸附法 激光共聚焦显微镜测定法 ◎ LDLR基因表达
● 动脉粥样硬化的研究
与动脉粥样硬化形成有关的细胞和分子
Endothelial Dysfunction in Atherosclerosis
Immunostained anti α-actin
Immunostained with BM8
Anti-c-fms treated
Anti-PDGF-Rβ β treated
Anti-Rat IgG treated
Distinct Cellular Hierarchy in Atherogenesis and Cuff-mediated Vascular Remodeling CuffAtherogenesis Cuff-mediated Lesion CuffEndothelial Cell
Polyethylene Cuff
Cuff Placement
Sham Operation
Bone Marrow-derived GFP-positive Cells in C57Bl/6 Mouse Vascular Remodeling Lesion
Cuff-placed Artery Sham-operated Artery
家
兔Leabharlann ◎ 常用日本大耳兔或新西兰白兔。 ◎ 兔是喂饲富含高胆固醇食物引起高脂血症 和动脉粥样硬化病变的敏感动物。 ◎ 通过调整饲料可制作内源性高脂血症和外 源性高脂血症模型。 ◎ 造模后形成的主动脉斑块及冠状动脉粥样 硬化病变与人类相似。
家兔高脂血症造模
◎ 灌胃给药操作不便，灌胃不当易造成死亡。 ◎ 高脂血症模型及动脉粥样硬化斑块形成时间较 长，耗费饲料，动物成本较高。 ◎ 血清中VLDL占总胆固醇的比例过高，且兔为草 食动物，其脂代谢与人差异较大。 ● 因无较为理想的高脂血症动物模型，目前有关 调脂新药和抗动脉粥样硬化药物的研究中，家兔仍 然是一种常用的实验动物。
Anti-α actin α (2 weeks)
SM1 (2 weeks)
Anti-α actin α (1 week)
GFP
Cy3
Merged
CD31-positive Cells in C57Bl/6 Mouse Vascular Remodeling Lesion
Cuff-placed Artery Sham-operated Artery
小鼠高脂血症造模
◎ 急性高脂蛋白血症的可用一种表面活化 剂(Triton WR-1 339)给小鼠尾静脉注射， 12～24 h即可诱导出高脂蛋白血症模型 ， 可用作初筛新药。 ◎ 正常小鼠用高脂饲料喂养造模时间长。 ◎ 采血量少，指标的检测受限。
apoE-/-小鼠
◎ 普通饲料喂养时，成年鼠血清胆固醇水平是 正常鼠的5～8 倍。 ◎ 当给予高脂负荷饲料(20 %脂肪，0.3 %胆 固醇后) ，血清中胆固醇浓度可达普通饲料喂 养升高值的4～5 倍。 ◎ 血脂升高稳定。 ◎ 遗传背景为C57BL/6品系。 ◎ 繁殖能力较强。
● 心血管系统的结构 1、心脏 2、血管 (1) 动脉 主动脉 外周动脉 (2) 静脉
● 高脂血症的研究
● 动脉粥样硬化的研究
● 血管再狭窄的研究
● 高脂血症的研究
血脂异常是血中总胆固醇（TC）、低 血脂异常是血中总胆固醇（TC）、低 密度脂蛋白—胆固醇（LDL密度脂蛋白—胆固醇（LDL-C）、甘油三 酯（TG）超过正常范围及（或）高密度脂 酯（TG）超过正常范围及（或）高密度脂 蛋白胆固醇（HDL蛋白胆固醇（HDL-C）低下。 高脂血症是指TC或（和）LDL高脂血症是指TC或（和）LDL-C或 （和）TG增高。血脂异常在动脉粥样硬化 （和）TG增高。血脂异常在动脉粥样硬化 （AS）的发生发展及其引起的心血管事件 AS）的发生发展及其引起的心血管事件 （CVE）中起非常重要的作用。 CVE）中起非常重要的作用。
Endothelial Cell
X
Macrophage
Smooth Muscle Cell
TC>6.24mmol/L LDLC>4.16mmol/L TC>5.72mmol/L LDLC>3.64mmol/L TC>5.20mmol/L LDLC>3.12mmol/L
TC<5.72mmol/L LDLC<3.64mmol/L TC<5.20mmol/L LDLC<3.12mmol/L TC<4.68mmol/L LDLC<2.60mmol/ L
降脂中药筛选及药理学研究
○ 体外模型 ○ 体内模型
体外筛选细胞模型 (研究阶段)
羟甲基戊二酰CoA(HMG-CoA) 还原酶 Y
胆固醇
脂酰辅酶A：胆固醇酰基转移酶 (ACAT)
肝细胞
甘油三脂 脂酰CoA转移酶 ?
卵细胞
体内筛选动物模型 (用于降脂药物筛选及机制研究)
○ 家兔 ○ 大鼠 ○ 小鼠 ○ 金黄地鼠
Fatty-Streak Formation in Atherosclerosis
Formation of an Advanced, Complicated Lesion of Atherosclerosis
Unstable Fibrous Plaques in Atherosclerosis
ApoE Knockout Mice
apoE-/-小鼠
◎ 行动灵敏，易发生逃逸。 ◎ 性情较其他品系小鼠急，抓持不当易被 咬伤。 ◎ 成年雄鼠之间易发生撕咬。
金黄地鼠(hamster)
◎ 较好地反映人类胆固醇代谢的调节。如肝脏合成 胆固醇的比例，人内源性胆固醇约有90%是肝外组 织合成的，雄性金黄地鼠肝外合成比例约为85%， 而雌性大鼠只有35%是肝外合成、雌性小鼠只有 55%在肝外合成。 ◎ 较低的高脂负荷即可建立理想的动物模型。饲料 中胆固醇含为0.2%即可成功造模。大鼠饲料中胆固 醇的含量多为1-2%，超过自身合成量的10倍， 且要 在饲料中加入胆汁酸盐才有能达到理想的血脂水平。 ◎ 建立高脂血症模型所需时间短。喂饲高脂饲料后 3-4周，血TC、TG 可达较为稳定的水平。
高 TC 血症 ， 特别是 LDL-C 增高 ， 是发 TC血症 特别是LDL 增高， 血症， LDL生CHD的最重要的危险因素。 CHD的最重要的危险因素 的最重要的危险因素。 流行病学资料显示，芬兰TC最高， 流行病学资料显示，芬兰 TC最高， TC最高 CHD发病率也最高 日本TC 最低， CHD发 CHD 发病率也最高 ， 日本 TC 最低 ， CHD 发 发病率也最高， TC最低 病率也最低。 病率也最低。
大鼠高脂血症造模
◎ 用高脂饲料喂养大鼠，一般7-10天可形成高脂血 症模型。 ◎ 影响因素： a. 饲料中掺人了胆固醇、猪油等油腻的高脂物 品，使饲料性质发生改变，有异昧，动物易出现 “厌 食”；而且不易于掌握精确的饲料用量。 b. 进口胆酸纳价格昂贵。 c. 高脂乳剂黏稠，不易抽取，灌胃造模时，用量 不易准确控制。 d. 所造模型大多为外源性胆固醇摄入过量所致。
Bone Marrow-derived ECs in C57Bl/6 Mouse Vascular Remodeling Lesion
1 week
2 weeks
Anti - vWF
Cuff Placement and Administration of antiantic-fms and anti-PDGF-Rβ mAb anti-PDGFC57Bl/6 ♀ (8 weeks of Age) on Normal Chow Diet Cuff Placement Day 2 Sacrifice
Macrophage like Cells in C57Bl/6 Mouse Vascular Remodeling Lesion
Cuff-placed Artery Sham-operated Artery
Anti-Macrophage BM8
Bone Marrow-derived Smooth Muscle Cells in Cuffed Femoral Artery of C57Bl/6 Mice
高脂血症患者的开始治疗标准值及治疗目标值
饮食疗法开始标 准 1、动脉粥样硬化 病（－） 其它危险因子（－） 2、动脉粥样硬化 病（－） 其它危险因子（＋） 3、动脉粥样硬化 病（＋）
药物疗法开始标 准
治疗目标值
TC>5.72mmol/L LDLC>3.64mmol/L TC>5.20mmol/L LDLC>3.12mmol/L TC>4.68mmol/L LDLC>2.60mmol/L