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如何分析琼脂糖凝胶电泳图

凝胶电泳结果分析
常见问题原因对策
DNA条带模糊DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。

电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,
PH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电
泳效果。

TBE建议使用10就更换。

所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm,温度
<30℃,巨大DNA链电泳,温度
<15℃,检查所用电泳缓冲液的缓冲能力,
注意经常更换。

DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量
DNA含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分。

有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白。

DNA变性电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀
释DNA。

出现片状拖带或涂抹带PCR扩增时出现涂抹带、片状
带或地毯样带,往往由于酶量多
或者酶的质量差,dNTP浓度高,
Mg2+浓度高,退火温度过低,
循环次数多。

减少酶量或更换酶,减少dNTP浓度,适
当降低Mg2+浓度,增加模板量,减少循
环次数。

不规则DNA 带迁移电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm,温度
<30℃,巨大DNA链电泳,温度
<15℃,检查所用电泳缓冲液的缓冲能力,
注意经常更换。

DNA变性电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀
释DNA。

带弱或无DNA 带DNA上样量不够增加DNA上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳
比琼脂糖电泳灵敏度高,上样量可适当降
低。

DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。

DNA跑出凝胶缩短电泳时间,降低电压,增加凝胶浓度。

EB染色的DNA所用光源不合

应用短波长(254nm)的紫外光源。

DNA带缺尖DNA跑出凝胶缩短电泳时间,降低电压,增加凝胶浓度。

分子大小相近的DNA带不易分

增加电泳时间,核准正确凝胶浓度
DNA变性电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀
释DNA。

DNA链大,常规电泳不合适。

在脉冲凝胶电泳上个分析。

电泳时ladder 扭曲配胶的缓冲液与电泳的缓冲液
不是同时配制。

同时配制,电泳缓冲液高出胶的1-2mm
即可。

电泳时电压过高电泳时电压不应超过20V/cm。

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