Procedure
To assemble the polymerisation cassette wet the plain glass plate (size 260 x 200 mm2) with a few
drops of water. Place the Gelbond PAGfilm,
IPG slab gels with linear gradients pH 4-7, 4-9, 6-10 and 4-12 are cast according to Görg et al. (1986) with the recipes of Righetti (1990) and Görg et al. (1998). Two starter solutions (an acidic one and a basic one)
凝胶浓度和蛋白质分离范围
凝胶种类 分离胶浓度 浓缩胶浓度 交联度 （％T） （％T） （C%）
4 4 4 4 － － 4 4 10 4 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 3.3 3 3.3
最使分离范 应用 围 （KD）
65－200 21－200 14－100 6.5－200 40－200 6.5－200 6.5－200 2.0-70 3.5-31 2.0-120 SDS-PAGE
括非变性电泳(native PAGE)和SDS-PAGE两种，
前者主要是在分离蛋白复合物时经常用到。后者
是在凝胶与缓冲系统中加入阴离子表面活性剂十
二烷基硫酸钠（SDS），蛋白质分子被大量SDS
阴离子包裹，消除了它们间原来携带的电荷差别，
因而其迁移率仅反映蛋白质分子大小，故广泛用
于蛋白质分子量的测定。
分离，去除干扰。此外，也证明该系统对脂多糖
和脂寡糖混合物的分离有效。
12%胶常用的低分子量标准蛋 白
名称 磷酸化酶B 牛血清白蛋白 卵清蛋白 碳酸酐酶 胰蛋白酶抑制剂 溶菌酶 来源 兔肌肉 牛 鸡蛋清 牛 大豆 鸡蛋清 分子量 97400 66200 45000 31000 21500 14400
一维凝胶染色
现在用于凝胶中蛋白染色的方法包括氨基黑 10、考马斯亮蓝R250、考马斯亮蓝R350、银 染、铜染及橙染(sypro orange)。最常用的为 考马斯亮蓝R250、考马斯亮蓝R350染色，为 了提高灵明度采用银染。
一维电泳的应用
初步测定蛋白质的分子量
初步分离蛋白质复合物，并进一步用于免疫组化分析
2DE仪器系统
恒温水浴
垂直板电泳 仪（第二向）
电源 等电聚焦仪 （第一向）
2DE在蛋白质组学方 案中所处的位置 State 1
Differential anaDatabase search MS/MS
State 2
Functiona l analysis
are prepared as described in Table 1. For better
polymerization, the acidic and basic solutions are adjusted to pH 7 with sodium hydroxide and acetic acid, respectively.
?
(以进行差别表达蛋白组分析为例) 1. 样品制备 2. IPG strips重泡胀及上样(rehydration and liading) 3. 等电聚焦 4. 胶条平衡，包括还原和烷基化 5. 第一向胶条转移到第二向 6. SDS-PAGE 7. 染色 8. 图像分析
一个SARS疫苗的研究和申报工作。
双向电泳(2DE)
原理：2DE就是第一向采用等电聚焦分离，第二向为SDSPAGE分离。由于2DE是依据蛋白质的两种不同性质，即等 电点和分子量进行分析，因此分辨率远高于其他任何一种 单一的电泳方法，是目前分析混合蛋白质样品最有效的手 段。（注意：双向电泳中的“双向”指的是按照蛋白质的 两个性质即“等电点和分子量”进行分离的原理。)
对重组表达蛋白的初步鉴定
将一维电泳和生物质谱相结合，达到对较简单蛋白复合 物的分离和鉴定
一维电泳在蛋白质组研究中的 应用举例
我们将一维电泳和LC-Ms/MS结合，成功进行如
下研究：
(1)血浆蛋白质组研究
(2)SARS病毒蛋白的分析鉴定,成功鉴定了SARS病
毒的S蛋白、N蛋白和E蛋白，有力推动了我国第
在蛋白质组学中对电泳的分类
一维电泳(one dimensional gel electrophoresis, 1DE)，现在普遍采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳 （PAGE）
二维电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2DE)，又称双向电泳
一维电泳
现在普遍采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），包
Tris-glycine 7.5 gels 10
12 15 4－15 4－20 10－20
Tris-tricine gels
16.5 16 10-20
肽、小蛋白 质
缓冲液的选择
通常在SDS-PAGE均选择Tris-glycine作为电泳的
缓冲系统。但在大部分缓冲系统中，SDS微团
(micelle)会干扰小分子蛋白质的分离，而Tristricine系统则可使小蛋白质－SDS复合物与微团
蛋白质电泳
－在蛋白质组学中的应用
原 理
蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端
羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒，并
可在电场内移动，其移动方向取决于蛋白质
分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨
基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷
不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，
从而达到分理的目的。
电泳原理示意图
双向电泳的操作程序
目前，普遍采用预制的固定pH梯度胶条(immobilized pH gradient strips, IPG strips)。商品化的IPG strips可 以从Amersham Pharmacia公司或BioRad公司购买。
IPG胶条制备(casting of IPG strips)