• 外周血嗜碱性粒细胞激活试验
• Basophil Activation Tests, BAT
• 细胞表面（结合型）sIgE • 体内sIgE生物学活性检测
嗜硷性粒细胞激活试验（BAT）
• 临床标本 • 外周抗凝血（全血）
• 特定过敏原将外周血已致敏的嗜碱性粒细胞激活 • 细胞鉴定与活化状态
• 流式细胞仪（FCM）检测特定标志
• 血清sIgE抗体谱
• 针对每种蛋白特异性抗体（sIgE）
component-resolved diagnosis (CRD)
• Molecular diagnosis will help to increase the sensitivity of the testing and, on the other hand, provides a more-detailed patienttailored risk profile.
• 血清sIgE介导 • 嗜碱性粒细胞
• KU812（KU812F）
• 标准过敏原
血清sIgE生物活性检测
• 采用FCM技术
• 检测
• 特定过敏原激发 • 血清sIgE介导 • KU812细胞激活试验
血清sIgE生物活性检测
• 抗原表位谱
• 生物信息学 • 筛选技术
血清sIgE生物活性检测 • 血蓝蛋白表位分析
食物过敏的实验诊断
─ 血清sIgE检测的现在和未来
李会强 天津医科大学
与食物相关的超敏反应
➢ 食物过敏 ➢ Food Allergy
➢ IgE-Dependent Immune Responses
➢ 食物不耐受 ➢ Food Intolerance
食物过敏（Food Allergy）
• 临床诊断 SPT
血清tIgE水平
• 化学发光免疫分析（现状） • chemiluminescence immunoassay
• CLIA
• 优点
• 准确；快速
血清sIgE水平
• 放射过敏原吸附试验（经典）
• radioallegosorbent test，RAST
血清sIgE水平
• 荧光酶免疫分析
• immuno-CAP
敬请： 批评指正！
嗜硷性粒细胞激活试验（BAT）
• FCM
• anti-CD123 • anti-HLA-DR • anti-CD63 or CD203c
嗜硷性粒细胞激活试验（BAT）
• 激活状态
• CD63+
嗜硷性粒细胞激活试验（BAT） • 卵巢发展蛋白
• 蟹黄 • Eri s 2
Fig rEris 2和CO诱导体外嗜碱性粒细胞激活结果
• 询问病史 • 体内试验 • 体外试验
sIgE
实验诊断
• tIgE • sIgE
• McAb • PcAb
问题：蛋白含量与生物活性
血清sIgE检测的现状
免疫球蛋白E（IgE）的发现
• 花粉过敏患者
• 1819年， Dr. John Bostock
• 输血所致过敏性哮喘
• 1919年， Ramirz
血清sIgE检测的未来
免疫球蛋白E（IgE）的检测
• 存在问题 • 科学问题
• 过敏原的复杂性与血清sIgE的异质性 • 血清sIgE含量测定与致病活性测定
• 技术问题
• 现有方法不能满足临床需要（简单、快速、通量）
光激化学发光分析（LICA）
➢ 发光体系
➢ 发光微球（FG）
➢ 接受能量 ➢ 受体微球（A）
血清sIgE水平
• 荧光酶免疫分析 • 金标准 • 单种过敏原 • 随机组合 • 定量分析
血清sIgE水平
• 斑点酶联免疫吸附试验
• Dot-ELISA（膜条） • 多种过敏原联合测定 • 廉价（符合国情） • 组合模式（固定）
血清sIgE水平
• 酶联免疫吸附试验
• ELISA（捕获法）
免疫球蛋白E（IgE）的检测（2）
• 蛋清sIgE
• 四种过敏原 • 受体微球-卵类黏蛋白（Gal d 1） • 受体微球-卵白蛋白（Gal d 2） • 受体微球-卵转铁蛋白（Gal d 3） • 受体微球-卵溶菌酶（Gla d 4）
Fig B 血清蛋清sIgE检测模式
血清sIgE检测（蛋清）- LICA • 分析性能参数
血清稀释曲线
血清sIgE的异质性
• 梭子蟹
• 过敏原sIgE抗体异质性
血清sIgE抗体谱检测
• 过敏原组分sIgE抗体谱
• 精准sIgE检测 • 精准脱敏治疗
已知抗原： 天然总蛋白溶液 天然单一蛋白纯品 重组单一蛋白溶液
血清sIgE和细胞表面sIgE
细胞学方法~生物学活性
血清sIgE生物活性检测
• 嗜碱性粒细胞激活试验（BAT）
免疫球蛋白E（IgE）的检测（1）
• 血清（游离）IgE的检测 • 总IgE水平
• Total IgE，tIgE
• 特异性IgE水平
• Specific IgE，sIgE
牛奶sIgE抗体： 牛奶蛋白 某一蛋白 抗原表位
血清tIgE水平
• 放射免疫吸附试验（经典）
• radioimmnosorbent test，RIST
• 免疫球蛋白E（IgE）
Fig 免疫球蛋白E（IgE）分子结构
• 1967年， Iቤተ መጻሕፍቲ ባይዱhizaka（瑞典）和Bennich & Jonansson（美国）
免疫球蛋白E（IgE）的体内分布
• 结合型IgE抗体
• 与嗜碱性粒细胞或肥大细胞结合
• 游离型IgE抗体
• 未与嗜碱性粒细胞或肥大细胞结合
图：IgE与IgE受体结合
LICA
ELISA
血清sIgE的精准检测
• 分子诊断（CRD）
• The determination of specific IgE to different allergens is called molecular diagnosis or component-resolved diagnosis (CRD)
➢ 感光微球（GG）
➢ 提供能量 ➢ 供体微球（D）
血清tIgE检测
• 双抗夹心-LICA
• 免“洗涤” • 高 - 精密度
tIgE
Fig 血清tIgE定量分析原理
血清tIgE检测(LICA)
• 分析性能参数
• 批内精密度
• 5.3 – 5.8
• 批间精密度
• 5.3 – 9.0
血清sIgE检测