HPLC法
2019年版
530 0
142
24 4 315 165 107 216 359
2019年版
580 73
707
97 45 414 219 132 372 694
4
色谱法在2019年版药典的应用
柱色谱 纸色谱 薄层色谱 气相色谱
• 高效液相色谱 • 离子色谱
正相色谱 反相色谱 离子对色谱
硅胶G
254个品种
硅胶G254
148个品种
硅胶H
15个品种
硅胶HF254
12个品种
硅藻土
2个品种
微晶纤维素
3个品种
氧化铝
1个品种
7
色谱法的应用：气相色谱
进样方式 直接进样 顶空进样
品种数量 75个 112个
检测方式 FID ECD
品种数量 181个 6个
ECD
伊曲康唑 联苯苄唑 恩氟烷 林旦乳膏 林旦 异氟烷
17
2019版药典二部采用常压凝胶色谱的品种
常压凝胶色谱
头孢尼西钠 注射用头孢尼西钠 头孢他啶 注射用头孢他定
头孢曲松钠
注射用头孢曲松钠
头孢呋辛钠 注射用头孢呋辛钠 头孢拉定 头孢哌酮钠 注射用头孢哌酮钠 氯唑西林钠 注射用氯唑西林钠
头孢唑肟钠 注射用头孢唑肟钠 头孢唑林钠 注射用头孢唑林钠
头孢替唑钠
素
或 指 纹 图 谱
HPL C
TL CS
UV
GC
其 他
中成
10版 新增
259
1818
25
9
54 426
8
32
16 2
6
709 12 8 24 1
药
05版 收载
281
1144
11
16 102 627
8
10 90 1
321 33 16 19 4
10版
提取 新增
物 05版
收载
21 3 2 5 1 11
50 16 17
色谱柱类型 氨基柱 丁基柱
三甲基硅烷柱 二羟基丙基硅烷键合
硅胶柱
苯乙烯-二乙烯基柱
品种数 5个 3个 2个 1个
1个
11
色谱法的应用：高效液相色谱
缬沙坦 盐酸帕罗西汀
a-酸性糖蛋白柱
瑞格列奈 瑞格列奈片
手性色谱柱α1酸性蛋白柱
苯磺酸顺阿曲库铵 注射用苯磺酸顺阿曲库铵 手性色谱柱chiralcel OD-RH
16
色谱法的应用：凝胶色谱法
固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样 品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长； 大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。
它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异 而完成分离。
常用于分离高分子化合物，如多糖、多肽、蛋白质、核酸 等。
响雾化过程。 被分析物的浓度和体积质量决定了进入光散射池的气溶胶
13
色谱法的应用：离子色谱
基本原理
离子色谱中发生的基本过程就是离子交换，
因此，离子色谱本质上就是离子交换色谱。 色谱柱类型
在离子色谱的基本组成中，重要的和与其 他高效液相色谱不同的就是抑制器和电导 检测器，离子色谱用的泵是PEEK材料衬里的不
阳离子交换柱 阴离子交换柱
锈钢泵。
品种个数 23个 14个
《中国药典》2019年版 新仪器分析方法应对
李志伟
1
现代分析技术的应用进一步扩大
红外光谱 原料药、制剂
气相色谱 残留溶剂
HPLC 检测器
分析技术
毛细管电泳
总有机碳测定法 （TOC）
离子色谱
2
《中国药典》2019年版一部新修订项目
项目 类别
鉴别
检查
特
含量测定
征
重金
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
属有 毒性 其 害元 成分 他
注射用头孢替唑钠
头孢噻吩钠 注射用头孢噻吩钠 头孢噻肟钠 注射用头孢噻肟钠 阿洛西林钠 注射用阿洛西林钠 普鲁卡因青霉素 注射用普鲁卡因青霉素
阿莫西林 阿莫西林胶囊 青霉素V钾 青霉素V钾胶囊 青霉素钠
注射用青霉素钠
青霉素钾 注射用青霉素钾 苯唑西林钠 注射用苯唑西林钠 美洛西林钠 注射用美洛西林钠 磺苄西林钠 注射用磺苄西林钠
•离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸等离子型化合物的分离。
14
色谱法的应用：离子色谱
阳离子交换柱 山梨醇及制剂 甘油果糖氯化钠注射液 甘露醇及制剂 利巴韦林及制剂 盐酸二甲双胍及制剂 苹果酸及制剂 富马酸及制剂
阴离子交换柱
肝素钠及制剂 帕米磷酸二钠及制剂 氯膦酸二钠及制剂 硫酸软骨素钠及制剂
18
2019版药典二部采用高效凝胶色谱的品种
门冬酰胺酶（埃希）
分子量5000~60000色谱亲水改性硅胶,UV,纯度
门冬酰胺酶（欧文）
分子量5000~60000色谱亲水改性硅胶,UV,纯度
注射用门冬酰胺酶（埃希） 分子量5000~60000色谱亲水改性硅胶,UV,纯度
注射用门冬酰胺酶（欧文） 分子量5000~60000色谱亲水改性nutes
供试品毛细管电泳谱图（杭州澳亚生物技术有限公司生产，批号：071015）
23
例：毛细管电泳（抑肽酶）
编号
1 2 3 4 5 6 7 Sigma对照品 标准规定
去丙氨酸-去甘氨酸抑肽酶（%）
6.9
上海所结果
去丙氨酸-抑肽 酶（%）
面积归一化法计算抑肽酶 主峰含量（%）
6.2
18.417 18.617
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
Minutes
sigma抑肽酶对照品毛细管电泳谱图
22
例：毛细管电泳（抑肽酶）
0.008
0.006
0.004
0.002
18.792
AU
0.000
-0.002
18.354 18.554
-0.004
-0.006
15
16
17
18
19
20
21
• 凝胶色谱
• 毛细管电泳
5
色谱法的应用：纸色谱
纸色谱的基本原理-分配色谱 固定相-吸附在滤纸上的水 移动相-展开剂 样品在水和展开剂中的溶解度不同，故分
配不同而达到分离。例：盐酸苯乙双胍
6
色谱法的应用：薄层色谱
2019版药典（二部）采用TLC的品种数量，共435个
TLC
品种数量
同物质，ELSD相应因子的变化比其它检测器要小得多。 对环境影响不灵敏，室温下即可操作。 没有溶剂前缘峰，适用于保留时间短的物质的检测。 与LC-MS的色谱条件一致，可直接进行方法转换。
28
色谱法的应用：蒸发光散射检测器
影响ELSD响应的因素 载气流速、雾化器设计与温度、流动相的组成和流速等影
球形硅胶。
90年代早期，粒径为 5 µm 的高纯硅胶，即所谓的 B 型硅胶被发展，并成为
这个行业填料的标准，这种 B 型硅胶含有微量的金属。
90年代后期，为了满足快速分离的需求，发展了 3 µm 或 3.5 µm 的球形硅胶，
其作用和性能逐渐的获得了人们的认同和接受。手性色谱柱的开发。
21世纪早期，为适应超快速的分离要求，粒径小于 2 µm 的填料被开发出来，
7
16
17 10 12 1 56
9 115
中药
10版 新增
374
526
3
材
05版 收载
339
347
5
2 26 1127 12 14 31 179 726 17 17 71
412 3 17 9 34 175 13 20 7 30
10版 新增
633
2492
31
12 134 1554
31
40
24 3
22
1138 15 25 16 32
21
AU
例：毛细管电泳（抑肽酶）
0.008 0.006 0.004 0.002 0.000 -0.002 -0.004 -0.006
15
1：保留时间为18.417分钟的是去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶， 2：保留时间为18.617分钟的是去丙氨酸-抑肽酶， 3：保留时间为18.829分钟的是抑肽酶峰
18.829
63.6
6.9
6.7
83.0
7.0
6.2
84.3
7.7
6.0
81.4
5.8
4.3
15.2
4.3
4.8
14.8
5.2
4.3
14.3
6.2
6.9
81.5
8.0%
7.5%
/
24
色谱法的应用：毛细管电泳
分离模式 毛细管区带电泳CZE 胶束电动毛细管色谱MEKC 毛细管等电聚焦CIEF 毛细管凝胶电泳CGE 毛细管电色谱CEC
20
色谱法的应用：电泳及毛细管电泳法
2019版药典二部采用电泳法的品种
乌司他丁 乌司他丁溶液 肝素钠乳膏
还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶，分子量 还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶，分子量 鉴别（琼脂糖电泳）
2019版药典二部采用CE的品种
盐酸头孢吡肟 注射用盐酸头孢吡肟 抑肽酶 注射用抑肽酶
有关物质 有关物质 有关物质 有关物质
合计
05版 收载
620
1507
16
16 298 1363 37