粒系<20%淋系<30%
临床意义
用于血液病的诊断和分型诊断
方案（Protocol）
2．首先每管中加入标本(骨髓或外周血)100ul(根据细胞的多少决定)，5ulCD45-PC5抗体。室温避光20分钟。
3．每管中加入固定液100ul，剧烈振荡混匀，室温避光15分钟。
4．各管中加入PBS4ml。
5．300g离心5分钟后，弃去上清液，振荡混匀。透膜剂100ul，轻轻混匀，室温避光5分钟。
采集部位骨髓采血
抗凝剂EDTA或肝素抗凝
要求1．样本量1ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻或溶血的标本不能用。
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
试剂
品牌剂型规格贮存
贝克曼库尔特
白血病免疫分型测定
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
双色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与细胞膜上或膜内相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到百分数。
标本采集与处理
受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态。
2．首先每管中加入5ulCD45-PC5抗体。
3．然后，按管上的标记，加入相应抗体各10ul(注意：必须是FITC和PE标记的抗体搭配)
4．各管中加入标本(骨髓或外周血)30～100u1(根据细胞的多少决定)，振荡混匀，室温避光20～30分钟。
5．溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
7．加抗体，阴性对照管中加入10ul，其余各管加入相应抗体各10ul，室温避光15分钟。
8．各管中加入4mlPBS，振荡混匀。
9．300g离心5分钟后，弃去上清液。
10．各管中加入PBS500ul，振荡混匀。
11．上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
参考值
CD34+<5%MPO+<5%
b.使用COULTERQ—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进行下一个样品测定。
（*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体）
细胞浆和核抗原
1．准备所需的管，并在管上标记上欲加入的抗体，其中一管是同型对照。
3：鞘液(No.8546859)液体20L室温
4：清洗液(No.8546930)液体5L室温
5：荧光微球(No.6605359)液体10ML2-8℃(Flow-Check)
仪器
BeckmanCoulterEPICSXL/FC500/Altra
操作-样本制备：
细胞膜表面抗原
1．首先准备所需的管，并在管上标记上欲加入的抗体。
成分1：单克隆抗体液体2—8℃
(CD34No. IM1871CD45-PC5No.IM2653/IM2652
Flow-Count荧光微球No.7547053)
2：全血溶血试剂(Q-Prep)液体(No.7546946)
A：甲酸液体70ML室温
B：碳酸钠等液体32ML室温
C：多聚甲醛液体14ML室温
(OptilyseC No.IM1401)液体室温