2020/4/3
细菌鉴定的基本程序
标本
直接涂片 革兰染色镜检
分离培养 取可疑菌落
鉴定试验和药敏试验
2020/4/3
结果报告
脓、痰、咽拭
脑脊液
血液
直接涂片染色
分离培养
增菌培养
观察菌落及溶血现象
触酶试验（－）
血清学 分类
杆菌肽
Optochin 敏感试验
胆汁 七叶苷
6.5％ NaCl
A群 链球菌
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肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别
菌 名
形态
菌落
胆汁 溶菌
Optoc hin
菊糖 分解
小白 鼠
毒 力
肺 矛尖状、成双 脐窝状、草绿 链 排列、有荚膜 色溶血环
+
+ +/－ +
甲 圆形、短链、 针尖状、草绿
链 无荚膜
色溶血环
－
－
－－
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乙型溶血性链球菌的鉴定
• β-溶血环 • 包括A、B、C、D、F、G群 • C群可采用血清学鉴定 • 其它群采用生化反应或其他鉴定试验
• 型特异性抗原（表面抗原）：细胞壁蛋 白抗原，有M、T、R、S四种，根据M抗 原不同，可将（－） • A群链球菌：杆菌肽敏感试验（+） • B群链球菌：CAMP试验（+）、马尿酸
钠水解试验（+） • D群链球菌：胆汁七叶苷试验（+）
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草绿色 链球菌
肺炎 链球菌
D群 链球菌
肠球菌
检验方法—直接镜检
• 方法:取标本直接涂片,革兰染色后镜检 • 初步报告:
“查见革兰阳性球菌” “查见革兰阳性矛尖状双球菌，有荚膜 ，疑似肺炎链球菌” 荚膜肿胀试验可确诊， “找到肺炎链球 菌”
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检验方法—分离培养
• 脓、痰、脑脊液标本－→接种血平板，进行分 离培养
• 液体培养基：呈沉淀生长现象
• 血平板：灰白色、细小、圆形、光滑的 、有不同溶血现象的菌落
分类
菌落特征
甲型（α）溶血性链 灰色、针尖状菌落、周围有草绿
球菌
色溶血环（ α溶血）
乙型（β）溶血性链 灰白色、细小菌落、周围有宽大
球菌
透明溶血环（ β溶血 ）
丙型（γ）链球菌 灰白色小菌落、无溶血环
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临床意义－－其他链球菌
• B群链球菌：条件致病菌，是新生儿败血 症和脑膜炎主要致病菌
• 肺炎链球菌：引起大叶性肺炎等疾病 • 甲型链球菌：条件致病菌，在一定条件
下引起亚急性细菌性心内膜炎。 • 变异链球菌：与龋齿有密切关系
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链球菌常规检验
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标本采集
• 根据临床标本不同采集不同标本
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临床意义－－A群链球菌
致病物质: • 致热外毒素：致热、细胞毒作用、使皮肤
产生红疹、抗原性强 • 溶血素：溶解红细胞、破坏血小板和白细
胞，分为溶血素O和溶血素S两种 • 侵袭性酶：透明质酸酶、链激酶、链道酶
，有利于细菌在体内扩散 • M蛋白：具有抗吞噬作用；与肾小球基底
膜有共同抗原成分，与超敏反应有关
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链球菌溶素O
• 对氧敏感、 • 抗原性强，刺激机体产生抗O抗体， • 抗O试验可用于风湿热等链球菌感染所致
超敏反应性疾病的辅助诊断
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临床意义－－A群链球菌
• 所致疾病 • 化脓性感染：扁桃体炎、丹毒、蜂窝织
炎、淋巴管炎、败血症等 • 猩红热 • 风湿热、链球菌感染后肾小球肾炎
在液体培养基中易形成长链 致病性强的菌株多为长链 在脓汁标本中多为短链
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链球菌电镜图
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链球菌革兰染色
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培养特点－－生长条件
• 营养要求高，在含血液、血清培养基上 生长良好
• 需氧、兼性厌氧 • D群链球菌可在10℃、45 ℃生长
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培养特点－－生长现象
肺炎链球菌生物学特性
• 形态染色：革兰阳性球菌，矛尖状，成双 排列，在人和动物体内形成荚膜
• 血平板上菌落特征：菌落细小、周围有草 绿色溶血环，48小时后，由于菌落自溶， 呈现“脐窝状”
• 生化反应：Optochin敏感试验（+） 胆汁溶菌试验（+） 菊糖分解试验（+）
• 动物试验：小白鼠毒力试验（+）
水解试验（+） • D群链球菌－－胆汁七叶苷（+）、6.5％氯
化钠生长（－） • 肺炎链球菌－－Optochin敏感试验（+）、胆
汁溶菌试验（+）、形态和菌落特征典型 • 甲型链球菌－－ Optochin敏感试验（－）、
胆汁溶菌试验（－）
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肠球菌
• 革兰阳性球菌，短链排列 • 营养要求高 • 在10℃、45℃、pH9.6条件下均可生长 • 血平板上溶血现象不定 • 触酶试验（-） • 胆汁七叶苷试验（+） • 6.5％NaCl生长试验（+） • PYR试验（+） • 血清学分类属D群
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肠球菌临床意义
• 引起的医院感染仅次于葡萄球菌 • 肠球菌感染以粪肠球菌为主 • 以尿路感染多见 • 有不同程度耐药
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肺炎链球菌电镜图
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肺炎链球菌光镜图
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肺炎链球菌 Gram’s染色镜检图
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链球菌在血平板上菌落特征
丙链
甲链
乙链
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分类－－根据溶血现象分类
• 甲型链球菌：属条件致病菌 • 乙型溶血性链球菌：致病力强 • 丙型链球菌：无致病力
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分类－－根据抗原构造分类
• 群特异性抗原（C抗原）：细胞壁多糖抗 原，可将链球菌分为20群（A、B、C、 D、E、D、E等），引起人类感染的链球 菌90％为A群。
50ml增菌液。 • 拮抗剂：硫酸镁（拮抗多种抗生素）、对氨
基苯甲酸（拮抗磺胺）等 • 培养时间：
常规培养：18～24小时至1周； 亚急性细菌性心内膜炎：观察7天至1月
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链球菌鉴定
• 细菌形态及染色性 • 菌落特征 • 鉴定试验
杆菌肽敏感试验 CAMP试验 胆汁七叶苷试验 Optochin敏感试验 血清学分群快速胶乳凝集试验
• 菌落特征： 甲型链球菌：针尖样菌落、周围有草绿色溶血 环； 乙型链球菌：灰白色小菌落、周围有透明溶血 环； 丙型链球菌：灰白色菌落、无溶血环 肺炎链球菌：灰白色扁瓶小菌落、周围有草绿 色溶血环，培养较久形成脐窝样菌落
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检验方法—增菌培养
• 增菌培养基：葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤 • 血液与培养基比例：1：10，即5ml标本，
链球菌属
• 分布：自然界、人和动物肠道、健康人 鼻咽部
• 所致疾病：致病链球菌引起各种化脓性 炎症、猩红热、风湿热等疾病。
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生物学性状
• 形态染色 • 培养特点 • 生化反应 • 抗原构造 • 分类 • 抵抗力
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形态染色
• 革兰阳性球菌，链状排列，无鞭毛，无 芽孢，可形成荚膜
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非β-溶血性链球菌鉴定
包括 • 肺炎链球菌 • 牛链球菌 • 无乳链球菌 • 草绿色链球菌 • 营养变异链球菌
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草绿色链球菌鉴定
α溶血或不溶血，胆汁七叶苷阴性，包括 • 变异链球菌群 • 唾液链球菌群 • 血液链球菌群 • 咽峡炎链球菌群
2020/4/3
鉴定依据
• A群链球菌－－杆菌肽敏感试验（+） • B 群链球菌－－CAMP试验（+）、马尿酸钠