根据实验步骤设定将传感器在样品板的 不同位置移动
生物膜光干涉技术Bio-Layer Interferometry (BLI)
当生物分子结合到传感器表面就形成了一层生物膜 生物膜对透过传感器的光的波形造成干涉现象 干涉现象以相位移动的方式被检测，从而可以检测结合 到传感器分子数量的变化
生物分子结合动力学
Affinity range (approximate) Sample Usage Temperature Control 21 CFR Part 11 Compliance
0.1 mM to 0.1 mM to 1 mM to 0.1 nM 0.1 nM 10 pM Non-destructive and recoverable 4°C above ambient to 40°C
Octet系统可提供的数据
亲和力测定
• Binding KD • On and off rates • Rank order
结合特异性
• Yes / No kinetic screening • Epitope binning / mapping
蛋白质浓度定量（混合物）
• Picogram to milligram dynamic range • Contaminant testing
Dip and Read Immunogenicity Kit Dip and Read Residual Protein A Detection Kit
Yes Yes Yes Yes Yes
No No
Kits
可以根据用户的应用设计传感器
为目前种类最多的供应商
传感器可再生使用
ADA ID Mab #2 Cycle # 1 nm Shift 0.7049
Mab #2
2
3 4 5 6 7 8 9 10
0.7435
0.7431 0.7822 0.7702 0.6712 0.7221 0.7654 0.7515 0.7729
Regeneration solution = 1mM HCl
Avg. nm Shift StDev %CV 0.7427 0.0346 4.7%
Test Samples
Time (sec)
120
•
• • •
利用标准品在不同浓度时结合速率的 差异来定量样品的浓度 15-30分钟可以分析各样品 标准曲线可以重复使用 病毒颗粒等其他样品也可定量
Binding Rate
Concentration
Octet 软件
• 可灵活输出各种格式， Excel表，JEPG格式等 • 动力学分析直接得到ka, kd and KD 结果 • 浓度分析直接得到，ug/ml, ng/ml等浓度计算 结果
Octet 产品简介
Octet Instruments • 5种型号 - Octet QK, Octet Qke, Octet RED, Octet QK384, Octet RED 384 • 使用通用的样品板(96 and 384 well) • 没有流路系统 • 样品经过检测后，仍然留在原处，可以回收再使用 Biosensors • 浸入样品即检测，1至16个样品可以同时检测 • 10种传感器可供选择，分析不同种类的样品 • 传感器为抛弃式设计，既可以检测共价键结合的样品 也可以再生使用 Software and computer • 常用实验方法已经预制在模板中 • 不需要单独购买软件 Validation options • 经过验证, 提供IQOQ服务, 符合美国FDA CFR Part 11 标准
Binding (nm)
Association
Dissociation
Time
• • • •
8-16 个样品可以被同时平行检测 检测数据被事实记录 实验方法可根据用户的要求来设计 动力学和亲和力由软件分析得到
Octet RED进行蛋白质浓度测定的工作流程
Octet Biosensors Standards Binding (nm)
Octet RED96
> 150 D 2, 5, or 10 Hz 8 1-8 1 Yes No 96 180 µL per well
Octet RED384
> 150 D 2, 5, or 10 Hz 16 1 - 16 2 Yes Yes 96 / 96HA 384 / 384TW 40 µL per well
兼容96孔板和384孔板 • 更高的通量,更少的样品消耗 • 最小体积只要40ul 16通道同时检测，让所需 实验时间更短 两个样品板位置 • 更多的实验方案 • 一次连续分析更多样品 全自动化解决方案 • 可与多种液体工作站连接
Octet 全自动功能
• Automated door and plate stage • Works with articulated arm and track-style robotic systems • Plate stage presents the biosensor tray, sample and reagent plates for robot • Octet software has automation hooks enabled to interact with robot software
• 更宽的应用范围
• • • • 直接检测粗制的样品，甚至是样品中存在不溶解的成分 耐受各种溶液环境，只有结合到传感器表面的分子才会被检测 病毒颗粒等大分子样品也能得到动力学结果 检测共价键结合的样品
• 更低使用和维护的成本
• 相对其他的非标记检测系统，耗材的成本低 • 系统稳定，未来的使用和维护成本也低
Octet QKe
> 5000 D 0.3 Hz or 0.6 Hz 1 1-8 1 Yes No 96, 96 HA 80 µL per well
Octet QK384
> 5000 D 0.3 Hz or 0.6 Hz 2 1 - 16 2 Yes Yes 96 / 96HA 384 / 384TW 40 µL per well
Available as option for all systems
96 HA 384 TW 96 well microplate with half-area well size ForteBio 384 tilted-well microplate
1 mM to 10 pM
Octet 384 系统的优点
For simple 1:1 binding: Ab + Ag
ka
kd
Complex
ka = rate of association or “on-rate”
kd = rate of disassociation or “off-rate”
Non-linear curve fit of data
军事医学科学院 2台 Novo Nordisc中国研发中心 中国生物制品药品检定所 神州细胞工程有限公司 中科院武汉病毒所 厦门大学 天津商业大学 上海药明康德新药开发有限公司 GSK中国研发中心 Novartis中国研发中心 上海旭华生物科技有限公司 江苏太平洋美诺克生物药业有限公司 江苏泰康生物医药有限公司
Y = Y0 + A (1 - e-kobs*t) KD =
Y=Y0+Ae-kd*t kd ka
ka=
kobs – kd
[Conc Ag (M)]
Octet 系统测定动力学的工作流程
Baseline Baseline Loading
Octet Biosensors
Buffer Ligand-Biotin Protein of Interest
Octet 系统和特点
Octet 系统的优点
• 更高的通量, 更快的实验流程
• 8-16个样品同时检测，是非标记技术中通量最高的 • 15-30分钟可以完成96个样品的分析
• 没有溶液控制系统，不需要清洗和维护流路，直接开始读取数据
• 操作简单
• 适应多用户的情况，经过半天的培训就可以操作和使用 • 不需要特别优化实验条件，传感器是抛弃式的
– SDi 2010 Market Report survey – 成长最快速的非标记技术公司
• 公司发展的远景：成为每个实验室都能拥有的分子互作 系统
专业的服务
•在中国有2名硬件工程师，3名应用工程师 •除了提供批量生产的生物传感器以外， 还可以为用户定制传感器 •提供实验方法开发和优化服务
国内用户名单
实时检测，非标记的 生物分子互作检测平台
Octet 可分析多种生物分子间的相互作用
Size
1000 nm 200 nm 75 nm
MW
Cells Bacteria Virus IgM IgA
1,000,000
Bacteria Virus Antibody - Antigen Receptor - Ligand DNA - DNA
Octet System Specifications
Octet QK
Molecular Weight Range Data Acquisition Rate # Spectrometers # Channels per Read Microplate Positions Biosensor Reracking Robot Compatible Microplate Formats Minimum Sample Volume > 10,000 D 0.6 Hz 1 1-8 1 No No 96, 96 HA 80 µL per well 0.1 mM to 0.1 nM
Mab #2 Mab #2 Mab #2 Mab #2 Mab #2 Mab #2 Mab #2 Mab #2