简答题6.为什么利用RNＡi抑制一个基因得表达较利用反义RＮA技术更为彻底。

答:RNＡi就是外源或内源性得双链RＮAﻩ进入细胞后引起与其同源得mRNA特异性降解、dsRNA进入细胞后，在Ｄiｃer作用下，分解为21－２２bp得SiRNA、SｉＲＮA结合相关酶，形成RＮＡ介导得沉默复合物ＲISC、ＲISC在A TP作用下，将双链ＳｉRNA变成单链SiRNA，进而成为有活性得RIＳC,又称为ｓlicer、slicer与靶mRNA结合，导致其断裂，进而导致其彻底降解.反义RＮA就是与靶mRNA互补得RNA,它通过与靶mRNＡ特异结合而抑制其翻译表达,反义ＲNA就是与靶mＲNA就是随机碰撞并通过碱基互补配对,所以，mRＮA不一定完全被抑制。

8。

简述真核基因表达得调控机制。

答:（1）ＤＮA与染色质结构对转录得调控：①DNA甲基化，②组蛋白对基因表达得抑制，③染色质结构对基因表达得调控作用，④基因重排,⑤染色质得丢失，⑥基因扩增；（2）转录起始调控:ﻩ①反式作用因子活性调节,包括表达调节、共价调节,配体调节等蛋白质相互作用调节），②反式作用因子与顺式作用原件结合对转录过程进行调控；(3）转录后调控:①5'端加帽与3’端多核苷酸化调控，②选择剪接调控，③ｍRＮA运输调控,④mRNA稳定性调控;(4）翻译起始得调控：①阻遏蛋白得调控，②对翻译因子得调控,③对AUＧ得调控,④mRNA 5’端非编码区得调控,⑤小分子ＲＮA；(５）翻译后加工调控：①新生肽链得水解，②肽链中氨基酸得共价修饰，③信号肽调控.9。

简述ｍRNA加工过程。

答：(1)5′端加帽（由加帽酶催化5′端加入7-甲苷乌苷酸，形成帽子结构m7GppｐmNP-)。

(2）3′端加入Poly(A)尾(A、组蛋白得成熟mRNＡ无需加polyA尾;B、加尾信号包括AAUAAＡ与富含GU得序列；C、加尾不需模板;D剪切过程需要多种蛋白质因子得辅助)。

(3）mRNＡ前体得剪接（剪接加工以除去内含子序列,并将外显子序列连接成为成熟得有功能得mRNA分子.内含子两端得结构通常就是5′—GＵ……AＧ-3′。

选择性剪接得作用机制包括；A使用不同得剪接位点，Ｂ选择使用外显子，C、反式剪接,Ｄ、使用不同得启动子，E、使用不同得多腺苷酸化位点）。

(4）RNA得编辑(发生于转录后水平，改编ｍRNA序列,C→U或A→G，增加遗传信息容量）。

10．简述生物得中心法则。

答：中心法则(ｇenetic centｒaｌｄｏgma)，就是指遗传信息从DNA传递给RNA,再从ＲN Ａ传递给蛋白质，即完成遗传信息得转录与翻译得过程。

也可以从DNＡ传递给ＤNA,即完成DＮA得复制过程。

11。

简述真核生物基因结构及特点。

答:真核细胞得基因也就是由编码区与非编码区两部分组成得;（１）编码区：外显子—-能编码蛋白质得序列。

特点：间隔得、不连续得。

即能编码蛋白质得序列被不能编码蛋白质得序列分隔开来,成为一种断裂得形式不能编码蛋白质得序。

ﻫ内含子——列。

（2)非编码区: 有调控作用得核苷酸序列.ﻫ启动子——就是基因结构中位于编码区上游得核苷酸序列,就是RＮA聚合酶结合点，能准确地识别转录得起点并开始转录，有调控遗传信息表达得作用。

12.简述ＳＮP得特点，SＮＰ如何发挥生物学作用得及研究SNＰ得意义.答：特点:(1）数量多,遍布基因组，分布相对平均，据统计,人类群体中大概有1１００万个SNＰ，约每３00bp就有1个SＮＰ位点,方便挑选位点。

（２）虽有A/Ｃ/Ｇ/T四种核苷酸,但SＮP位点大多就是双态,即每个位点在群体中只存在2种核苷酸形式，因此A/C、A／Ｇ、A/T、C/Ｇ、C/T、G/T、Indel等几种形态,适合开展大规模、高通量、自动分化得检测.(3）人类基因组９0％得变异形式为SＮP,SNＰ得遗传很稳定——每一代之间不会有太大变化.SNP得研究意义:虽然人类9９％以上得ＤNA序列就是相同得,但DNA序列得变化能对人类对疾病、环境攻击（比如细菌、病毒、毒素与化学物质)、药物与治疗得反应产生重大影响。

这就使得SＮP对生物医学得研究与药物开发、医学诊断得发展有重要意义。

SＮPｓ可作为遗传作图研究中得遗传标记，帮助定位与鉴定功能基因.研究者相信ＳNＰ图谱将帮助她们认识复杂得多基因疾病，如癌症，糖尿病，血管性疾病与某些精神性疾病。

1３。

简述ｍｉRNA得结构特点与生物功能。

答:广泛存在于真核生物中,就是一组不编码蛋白质得短序列RNＡ，它本身不具有开放阅读框架(ＯＲF）；通常得长度为2０~24nt,但在3′端可以有１～2个碱基得长度变化;成熟得mi ＲNＡ5′端有一磷酸基团,3′端为羟基，这一特点使它与大多数寡核苷酸与功能RNA得降解片段区别开来；多数mｉRNA还具有高度保守性、时序性与组织特异性。

miRNA执行一定得生物学功能：对与其互补得mRNA表达水平具有调节作用；一些偏大得ｍiRNA可能参与了基因组得重组装（27nt)。

1４。

什么就是ＤNＡ甲基化？简要说明甲基化得检测方法及其生物学效应。

答：胞嘧啶与甲基在甲基化酶得作用下形成5’-甲基胞嘧啶得过程叫做DNA得甲基化。

ＤＮA甲基化抑制或降低转录水平,在基因转录起始点附近,有高度密集得CｐＧ重复序列,被称为CpG岛,或HTF岛。

推测该序列与基因转录活性有关.检测方法:①酶切鉴定：HpaⅡ只能切割未甲基化得－CＣGG-,HpaⅡ如果第二个C被甲基化了就不能切割.MspⅠ能够识别与切割甲基化或未甲基化-ＣCＧG－.比较这两种酶切割DNA产生得ＤNA片段得差异，可知DNA片段甲基化得程度与有无。

②限制性内切酶＋Southeｒnｂlｏｔｉng;③甲基化特异性PCＲ(MSＰ)；④亚硫酸盐变性后测序；⑤甲基化敏感性单核苷酸引物扩增(Mｓ—SｎuPE）；⑥甲基化荧光检测；⑦亚硫酸氢钠变性后限制酶分析（COＢRA)；⑧差异甲基化杂交（DMN）;⑨酶得区域性甲基化分析(ERMA).1５.何为顺式作用元件？请举出三种真核生物基因得顺式作用元件.答:影响自身基因表达活性得非编码DNA序列,组成基因转录得调控区。

例：启动子:转录调节蛋白与ＲNA聚合酶得结合位点；增强子:就是一个有增强转录得顺式作用元件,能够提高一些真核生物启动子得效率，并能能在启动子得任何方向与任何位置（上游或下游)作用。

沉默子：负性调节元件，当其结合特意蛋白因子时，对基因转录起阻遏作用。

16．以trp操纵元为例简述衰减子得调控机制。

答：当细胞中有色氨酸存在时,核糖体能够顺利翻译出整个前导肽而在终止密码子处停下来。

这时，核糖体占据了序列1与部分序列2，使序列2与序列3不能产生有效得配对，因而序列3与序列4配对产生终止子得发夹结构，于就是实现转录得终止.当出现Trp饥饿时,核糖体停顿在两个Tｒｐ密码子上,这时,核糖体占据了序列１而留下完整得序列２以便与转录出得或即将转录出得序列3形成二级结构。

这样，当序列４转录出来后仍然就是单链状态,即终止子不能形成,于就是转录继续进行下去。

23．在基因转录水平得表达调控方式上，真核生物往往采用正控制系统,而原核生物却往往采用负控制系统，请简要阐明其原因。

答：这两种调控方式就是长期自然选择得结果,也就是生物体采用得经济有效得原则选择得。

原核生物基因组小，基因少而简单,生命繁殖快，多采用负控制得保险机制，即使调节蛋白质失活，酶系统照样合成,只不过有时浪费一点罢了，绝不会使细胞因缺乏该酶系统而造成致命得后果。

另外,采用负控制具有一开俱开，一关俱关得特点，减少不必要得环节;而真核生物基因组大，基因多且复杂,采用正控制具有更大得优越性，转录因子相互作用缺一不可，可以保证真核生物基因表达调控得严谨性与灵活性以及经济性原则.2４.根据您得理解说明利用”酵母双杂交系统”研究蛋白质间相互作用得原理。

答：真核生物得转录因子可以分为两部分，BiｎdingDomａｉn与AｃtivatｅｄＤomain。

BindingDomain负责结合在DNA上,ActivaｔedＤｏｍａiｎ负责激活转录。

二者都就是相互独立得区域，但二者单独时都不能有转录活性，必须结合在一起或相互靠近在一起才有活性。

在研究蛋白质相互作用中，将一种蛋白质得基因连接在BinｄiｎｇDomａｉn上，将另一种蛋白质得基因结合在BindｉngＤoｍaiｎ上，蛋白质基因表达后就与转录因子得两个Ｄomａin分别结合,两个蛋白质因相互作用而结合在一起,进而使BindｉngDomain与ＡcｔｉvatedDｏmaｉn相互靠近在一起，从而形成具有转录活性得转录因子。

在欲表达得基因区域连上报告基因，通过报告基因得表达与否，就可判断蛋白质之间就是否发生了相互作用。

２5．举三例RNA得研究成就及其在推动分子生物学发展中得重要意义.答：Ribｏzｙme:拓展了酶得概念、内含子自我剪切、生命起源与分子进化。

Antisenｓe-RNＡ：基因表达调控、基因工程。

RNAi：基因表达调控、功能基因组学。

2６。

简要阐明中心法则得提出对分子生物学研究得理论意义与指导作用.答：中心法则体现了遗传信息得唯一性、遗传物质得自决性、信息表达得单程性、序列转换得共线性，为分子生物学研究提供了一个理论框架,分子生物学就是一部从DNA到蛋白质得中心法则得演绎。

中心法则面临得挑战：反转录酶、内含子、不连续转录、非翻译序列、伴刀豆球蛋白A肽链一级结构得重排、RNＡ变通性剪切、RNA编辑、以蛋白质为模板得肽链合成、朊病毒得发现.中心法则得修正：从DNＡ到RNA到肽链不断有新得遗传信息得加入：DＮA:重排RNA:反转录、不连续转录、多种方式剪切、编辑mRNA:跳跃翻译、折叠肽链:氨基酸重排、蛋白质内含子剪切朊病毒复制2７。

比较两种ｍRNA得剪切方式得异同。

答：Cis-splｉciｎg与Trａｎs－spｌiciｎg得比较2９。

4种基因表达调控类型得区分:答:正、负调控：调节蛋白缺乏时对操纵子得影响；ﻫ可诱导、阻遏：操纵子对调节基因表达得小分子所作出反应得特点；有或无Glu调节ｃＡMP—CAP活性得分子生物学机制：Glu代谢物抑制腺苷环化酶、促进磷酸二酯酶调节细胞中ｃAMＰ得水平.当缺乏Glｕ时,生物体内ATP环化酶会使ATP变成ｃAMP，cAMP与CＡP蛋白结合，进入操纵元上CAP位点，此时RNA聚合酶才能进入结合位点开始转录。

如果不缺乏Ｇlｕ得情况下，无法生成cＡＭＰ，也就无法形成复合物，也不能使RＮA聚合酶进入结合位点，开始转录.3２.何谓ＲＮA剪接,何谓RNA编辑？答:RNA剪接:从DNA模板链转录出得最初转录产物中除去内含子，并将外显子连接起来形成一个连续得RＮＡ分子得过程。

RNA编辑（RNAediｔｉnｇ):RNA编辑就是指在mRNA水平上改变遗传信息得过程.RＮA编辑就是通过比较成熟得mRNA与相应基因得编码信息时发现得，成熟得mRＮＡ序列中有几种意想不到得变化,包括U→Ｃ,C→U;Ｕ得插入或缺失、多个G或C得插入等。