常用试剂的配制
1．无Ca2+、Mg2+Hanks液
NaCl 4.5g KCl 0.2g
NaHCO
3
0.175g
Na
2HPO
4
·12H
2
O 0.076g
KH
2PO
4
0.03g
葡萄糖 0.5g
0.4%酚红 2.5ml
将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO
3调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。
2．甲基红试剂
（1）成份
甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml
95％乙醇 300ml
（2）用途：测定甲基红反应。
3．Hanks液（原液）
原液甲： NaCl 160g
KCl 8g
MgSO
4·7H
2
O 2g
MgCl
2·6H
2
O 2g
上述试剂加入800ml双蒸水。
溶解。
CaCl
2
2.8g溶于100ml双蒸水
上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。
原液乙： Na
2NPO
4
·12H
2
O 3.04g
KH
2PO
4
1.2g
葡萄糖 20g
加入800ml双蒸水，溶解。
0.4%酚红溶液100ml
上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。
使用时甲,乙原液按下列比例配成Hanks 液使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO
3
调整PH值。
4．0.4%酚红溶液
称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒
几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。
5．pH7.2 Tris-NH
4
CI溶液(红细胞崩解液）
Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g
NH
4
Cl（氯化氨) 3.735g
加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。
6．0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液
巴比妥 1.84g
加蒸馏水 200ml 加热溶解
巴比妥纳 10.3g
叠氮纳 0.2g
加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。
7．磷酸盐缓冲液(PB)
A 液：为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH
2PO
4
·H
2
O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最
后补加蒸馏水至 1000ml 。
B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na
2HPO
4
.7H
2
O 3.6g（或 Na
2
HPO
4
·12H
2
O
71.6g, 或Na
2HPO
4
· 2H
2
O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。
若再加
蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。
8．0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS）
硼酸钠（Na
2B
4
O
7
.10H
2
O） 0.46g
硼酸（H
2BO
3
） 0.51g
加蒸馏水至100ml 溶解。
9．PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法一：
0.2mol/L Na
2HPO
4
（ Na
2
HPO
4
·12H
2
O 71.6g加蒸馏水至1000ml）
0.2mol/L NaH
2PO
4
（NaH
2
PO
4
·2H
2
O 35.6g加蒸馏水至1000ml）
取0.2mol/L Na
2HPO
4
81.0ml 加0.2mol/L NaH
2
PO
4
19ml,再加1900mlH
2
O和
17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。
PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。
配制方法二：
甲液（0.1mol/LKH
2PO
4
溶液）：KH
2
PO
4
13.608g，加蒸馏水至1000ml。
乙液（0.1mol/L Na
2HPO
4
溶液）：Na
2
HPO
4
35.814g，加蒸馏水至1000ml。
取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。
再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。
10．0.05mol/L pH9.6碳酸缓冲液
Na
2CO
3
1.59g
NaHCO
3
2.93g
加蒸馏水至1000ml。
ELISA实验包被用。
11．0.01mol/L pH7.4 PBS内含2%BSA（牛血清白蛋白）
取BSA2ml加0.01mol/L pH7.4PBS至100ml即可。
ELISA实验封闭用。
12．PH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。
0.2mol/L Na
2PO
4
(28.4g/L) 25.7ml
0.1mol/L柠檬酸(19.2g/L) 24.5ml
加蒸馏水至100ml即为pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。
13．底物溶液
pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液加入邻苯二胺1mg/ml，再加入30%的H
2O
2
(1μl/ml)溶
解后即为ELISA底物液，临用前配制，避光保存。
14．2mol/L硫酸
浓H
2SO
4
（36N）取 1ml36N的H
2
SO
4
缓缓加入18 ml蒸馏水内即为2mol/L，用于ELISA实
验终止反应。
15．清洁液的配制
清洁液分高、中、低液三种。
低浓度清洁液
重铬酸钾 100g
水 750ml
硫酸 250ml
中浓度清洁液
重铬酸钾 60g
水 300ml
硫酸 460ml
高浓度清洁液
重铬酸钾 100g
水 200ml
硫酸 800ml
先将重铬酸钾倒入自来水中，然后加入浓硫酸，边加硫酸边用玻璃棒搅拌。
由于加入浓硫酸后产生高热，故加酸时要慢，溶器应用耐酸耐高温塑料或陶器制品。
配制好的清洁液，应存于有盖的玻璃溶器内。
需要浸泡的玻璃器皿一定要干燥，如
果清洁液经过长期使用已呈黑色，表明已经失效，不宜再用。
由于清洁液有强腐蚀性，故操作时要十分注意。
16．PH6.4 l/l5mol/ml磷酸盐缓冲盐水（PBS）：
（1）l/l5mol/ml 磷酸二氢钾溶液
KH
2PO
4
9.04g
蒸馏水加至1000ml （2）l/l5mol/ml 磷酸氢二钠溶液
Na
2HPO
4
·2H
2
O 11.87g
（或 Na
2HPO
4
·l2H
2
O 23.86g
蒸馏水加至1000ml （3）PH6.4 l/l5mol/ml 磷酸盐缓冲盐水（PBS）
l/l5mol/ml磷酸二氢钾溶液 73ml
l/l5mol/ml磷酸氢二钠溶液 27ml
NaCl 0.5g
混匀溶解即可。
17．柯氏试剂(靛基质试剂)
（1）成份
纯戊醇 150ml
浓盐酸 50ml
对二甲基氨基苯甲醛 10g
（2）制法：将对二甲基氨基苯甲醛加入纯戊醇内，使其溶解。
将浓盐酸一滴滴慢慢加入，边加边摇，不能加得太快，以致温度升高溶液颜色变深。
（3）用途：测定细菌能否产生吲哚。